(仪器分析课件）10.6 高效毛细管电泳知识讲稿.pptVIP

仪器分析教程 第10章 高效液相色谱法 10.6 高效毛细管电泳 High Performance Liquid Chromatography （HPLC) 10.6.1 HPCE的装置 10.6.2 HPCE的分离原理 10.6.3 HPCE的特点 10.6.4 HPCE的分离模式 10.6 高效毛细管电泳 电泳：带电粒子在外电场的作用下，向与其所带电荷相反的电极迁移的现象。速度ν电泳 电渗流现象：玻璃表面存在硅羟基, pH3时, 形成双电层，在高电场的作用下引起柱中的溶液整体向负极移动，速度ν电渗流。 10.6 高效毛细管电泳 1.经典电泳分离法 电泳法：利用电泳现象对物质进行分离分析的方法。所用分离柱的柱径大，柱较短，分离效率不高（远低于HPLC），温度影响大。 2.高效毛细管电泳 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm内径的毛细管； 二是采用了高达数千伏的电压。 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加， 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 10.6.1 HPCE的装置 HPCE的基本装置为：高压电源、毛细管柱、进样系统、检测器、两个贮液器和控制及数据处理系统。其仪器装置下图所示。 高效毛细管电泳仪器（1） 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 高效毛细管电泳仪器（2） 10.6 高效毛细管电泳 高效毛细管电泳仪器（3） 10.6 高效毛细管电泳 10.6.2 分离原理 电场作用下，柱中出现电泳现象和电渗流现象。 带电粒子的迁移速度等于电泳和电渗流两种速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反，ν电渗流 ν电泳时,阴离子在负极最 后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由 于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。 10.6 高效毛细管电泳 10.6.3 毛细管电泳的特点 高灵敏度：可检测出低至10-21 mol/L浓度的物质。 高分离效率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。 高分析速度：可在3分钟内分离30种阴离子；1.7分钟分离19种阳离子;4分钟内将碱金属和镧系元素的24种阳离子完全分离。 试样用量少：仅需几nL（10-9 L）的试样 仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液。 10.6 高效毛细管电泳 10.6.3 毛细管电泳的特点 不足之处： 进样不够方便。应用范围相对较窄。 分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。 10.6 高效毛细管电泳 10.6.4 毛细管电泳的特点分离模式 按照毛细管内的分离介质和分离原理的不同，HPCE目前有以下6种主要的分离模式。 1.毛细管区带电泳（CZE） 最普遍、最基本的一种分离模式。 CZE分离是基于各组分的净电荷与其质量比（荷质比）的 差异而实现的，其分离介质通常为电解质水溶液， 主要应用于氨基酸、肽、蛋白质、多种离子和带电粒子的 分离分析，还可用于对映体拆分和构像分析等。 10.6 高效毛细管电泳 10.6.4 毛细管电泳的特点分离模式 2.毛细管凝胶电泳（CGE） 将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测定蛋白质、DNA等。 10.6 高效毛细管电泳 在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。在电场力的作用下，胶束在柱中移动。由于电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，则带负电的胶束以较慢的速度向负极方向移动，中性试样分子在胶束相和溶液（水相）两相间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长。可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。 3.毛细管胶束电动色谱（MECC) 10.6 高效毛细管电泳 10.6.4 毛细管电泳的特点分离模式 4.毛细管等电聚焦（CIET) 5.毛细管等速电泳（CITP) 6.毛细管电色谱（CEC）