L-苏氨酸发酵种子培养基及培养条件优化.docVIP

L-苏氨酸发酵种子培养基及培养条件优化 　　摘要：采用正交试验设计对菌株ＷＳ４００６－７Ｅ－ＮＵＴ－２１ Ｌ－苏氨酸发酵的种子培养基进行优化，同时对影响种子生长的条件如种子培养时间、种子液初始ｐＨ值、种子装液量等进行了研究，最终确定了Ｌ－苏氨酸发酵的最优种子培养条件。确定了种子培养基的最佳组成为葡萄糖３０ ｇ／Ｌ、硫酸铵３ ｇ／Ｌ、玉米浆４０ ｇ／Ｌ、酵母膏５ ｇ／Ｌ；种子的最佳培养条件为２５０ ｍＬ的三角瓶中装液量２５ ｍＬ，种子培养基的初始ｐＨ值７．０，培养时间１６ ｈ，接种量１０％。 　　关键词：Ｌ－苏氨酸；发酵；种子培养基；培养条件；优化 　　中图分类号：ＴＱ４６４．７文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）13－2730-03 　　 　　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｅｄ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｌ－ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ 　　 　　ＬＩＵ Ｋｅ－ｋｅ１，ＺＨＡＮＧ Ｌｉ２，ＨＡＮ Ｘｉａｎｇ－ｍｉｎ１， ＺＨＡＮＧ Ｊｕｎ－ｓｈｅｎｇ２，ＹＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｚｈｉ２ 　　（１． Faculty of Animal Science Technology，Ｇａｎｓｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００７０， Ｃｈｉｎａ； 　　２． Ｊｉａｎｇｓｕ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ， Ｔａｉｚｈｏｕ ２２５３００， Ｊｉａｎｇｓｕ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ Ｌ－threonine ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ ＷＳ４００６－７Ｅ－ＮＵＴ－２１ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ． Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ， ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｍｉｇｈｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｓｅｅｄｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ， ｐＨ， ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｖｏｌｕｍｅ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ； ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｗａｓ ３０ ｇ／Ｌ ｇｌｕｃｏｓｅ， ３ ｇ／Ｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｓｕｌｆａｔｅ， ４０ ｇ／Ｌ ｃｏｒｎ ｓｔｅｅｐ ａｎｄ ５ ｇ／Ｌ ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ． Ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｓｅｅｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ ２５ ｍＬ ｌｉｑｕｉｄ ｓｅｅｄ ｉｎ ２５０ ｍＬ ｏｆ ｆｌａｓｋ， ｏｒｉｇｉｎａｔｅ ｐＨ ７．０， ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ １６ ｈ ａｎｄ ｗｉｔｈ ａｎ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ １０％． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌ－ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ； ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ； seed culture medium； culture conditions； ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ 　　 　　Ｌ－苏氨酸是一种必需氨基酸，被广泛应用于生产食品、医药、饲料添加剂等［１］。近年来，随着人民生活水平的提高和养殖业的迅速发展，苏氨酸的需求量大增，但是受技术限制，国内苏氨酸的产量较小，生产工艺和产品质量均不成熟，绝大部分的需求依赖进口［２］。目前，微生物发酵法以其生产成本低、节约资源、环境污染小等优点成为工业化生产苏氨酸的主要方式。微生物发酵种子培养的目的是在较短的时间内获得大量健壮活跃的种子，为后续发酵产物的形成打下坚实的基础，若种子质量异常，会给发酵造成极大的影响［３］。而获得优良种子的主要因素包括选用合适的种子培养基及良好的种子培养条件。对Ｌ－苏氨酸生产菌ＷＳ４００６－７Ｅ－ＮＵＴ－２１的种子培养基及部分培养条件进行了研究，旨在为Ｌ－苏氨酸的工业化生产提供理论依据。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　１．１．１菌株Ｌ－苏氨酸产生菌ＷＳ４００６－７Ｅ－ＮＵＴ－２１为从江苏畜牧兽医职业技术学院生物技术实验室保存的菌株ＷＳ４００６中分离诱变选育得到的菌株，初步鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ）。 　　１．１．２培养基［４］基础种子培养基：葡萄糖４０ ｇ／Ｌ，硫酸铵４ ｇ／Ｌ，玉米浆３０ ｇ／Ｌ，酵母膏５ ｇ／Ｌ，Ｋ２ＨＰO４ １ ｇ／Ｌ，ＫＨ２Ｐ０４ １ ｇ／Ｌ，ＭｇＳ０４?７Ｈ２０ ０．２５ ｇ／Ｌ，Ｆｅ２ＳO４?７Ｈ２O