第二章核酸2011.pptVIP

（1）DNA双螺旋结构模型的依据 X-射线衍射数据 电位滴定行为 用电位滴定法证明DNA的磷酸基可以滴定，而嘌呤和嘧啶的可解离基团不能滴定，说明它们被某种力束缚着。（由氢键连接起来） Chargaff 法则 1950年，Chargaff等人对多种生物、不同组织的DNA碱基组成进行了分析。发现： 有种属特异性 无组织、器官特异性 不受年龄、营养和环境的影响 不论种属、组织来源，所有DNA分子 [A] ? [T]；[G] ? [C] [A] + [G] ?[T] + [C] （2）DNA双螺旋结构的要点 （1）DNA分子由两条多聚脱氧核糖核苷酸链(简称DNA单链)组成。两条链沿着同一根轴平行盘绕，形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反，即其中一条链的方向为5′→3′，而另一条链的方向为3′→5′。 （2）嘌呤碱和嘧啶碱基位于螺旋的内侧，磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基环平面与螺旋轴垂直，糖基环平面与碱基环平面成90°角。 （3）螺旋横截面的直径约为2 nm，每条链相邻两个碱基平面之间的距离为0.34 nm，每10个核苷酸形成一个螺旋，其螺矩（即螺旋旋转一圈）高度为3.4 nm。 （4）两条DNA链相互结合形成双螺旋的力是链间的碱基对所形成的氢键。碱基的相互结合具有严格的配对规律，即腺嘌呤（A）与胸腺嘧啶（T）结合，鸟嘌呤（G）与胞嘧啶（C）结合，这种配对关系，称为碱基互补。A和T之间形成两个氢键，G与C之间形成三个氢键。 在DNA分子中，嘌呤碱基的总数与嘧啶碱基的总数相等。 双螺旋结构模型遗传学意义 双螺旋结构模型直接解释了遗传物质自我复制的机制。 几种不同类型的双螺旋 A-DNA、B-DNA和Z-DNA的主要结构特点 （3）双螺旋结构的稳定性 氢键：维持这种稳定性的因素包括：两条DNA链之间形成的氢键； 碱基堆积力：由于双螺旋结构内部形成的疏水区，消除了介质中水分子对碱基之间氢键的影响； 介质中的阳离子：（如Na+、K+和Mg2+）中和了磷酸基团的负电荷，降低了DNA链之间的排斥力、范德华引力等。 tRNA三叶草型二级结构 tRNA的二级结构都呈” 三叶草” 形状，由“四臂四环”组成。 四臂 ：氨基酸臂；D臂；反密码子臂； T?C臂 四环 ：D环；反密码子环；T?C环； 可变环 （3）asRNA asRNA，反义RNA，可通过互补序列与特定的mRNA结合，抑制mRNA的翻译，还可抑制DNA的复制和转录。 RNA干扰（RNA interference, RNAi）：用双链RNA（dsRNA）抑制特定基因表达的技术称RNA干扰。 碱基对间的氢键 碱基堆积力 环境中的阳离子 免疫印迹（western blotting）：是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术。它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。 典型的印迹实验包括三个步骤①蛋白质的电泳分离；②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上。③免疫学检测。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端，极大地提高了其利用率、分辨率和灵敏度，使其成为使用最广泛的免疫化学方法之一。 五、核酸的研究方法 （三）凝胶电泳 常用凝胶电泳种类： 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 （1）mRNA与hnRNA 真核生物mRNA的前体，在核内合成，包括整个基因的内含子和外显子的转录产物，形成分子大小极不均匀的hnRNA，核内不均一RNA。 （2）snRNA和snoRNA snRNA，核小RNA，主要存于细胞核中，占细胞RNA总量的0.1~1%，与蛋白质以RNP（核糖核酸蛋白）的形式存在，在hnRNA和rRNA的加工、细胞分裂和分化、协助细胞内物质运输、构成染色质等方面有重要作用。 snoRNA，核仁小RNA，广泛分布于核仁区，主要参与rRNA前体的加工。 4、其他RNA 四、核酸的性质 （一）一般理化性质 1. 为两性电解质，等电点低，生理pH条件，带负电荷。通常表现为酸性。 DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电点为2～2.5。 2. DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末。 3. DNA溶液的粘度极高，而RNA溶液要小得多。 4.酸或碱水解 糖苷键和磷酸酯键都能被酸