小麦条锈病不同抗性材料中分子标记Yr24-2检测.docVIP

小麦条锈病不同抗性材料中分子标记Yr24-2检测 　　摘要：为了研究小麦条锈病的抗性遗传基础及分子标记辅助持久抗性新品系选育技术，利用２２个条锈病抗性材料及４个感病材料并以近缘野生材料作为对照，进行抗性基因Ｙｒ２４分子标记的检测。结果表明，只有３个抗病材料（３、６、１２）扩增出目标带（１６５ ｂｐ），但扩增条带都较弱；４个感病材料（２３～２６）里没有目标条带出现；野生材料中的扩增结果表明该抗性基因及其分子标记来源于硬粒小麦。 　　关键词：条锈病；分子标记；Ｙｒ２４ 　　中图分类号：Ｓ４３５．１２１．４＋２；Ｑ９４３．２文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）12－2553-03 　　 　　Detection of Molecular Marker Yr24-2 in Stripe Rust Resistance Wheat Cultivars 　　 　　ＺＨＯＵ Ｙａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｓｈｅｎｇ－ｌｉ，ＷＥＩ Ｑｉ－ｃｈａｏ 　　（Ｋｅｙ Ｄｉｓｃ???ｐｌｉｎｅ Ｏｐｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｎ Ｃｒｏｐ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｉｎ Ｈｅｎａｎ／Ｈｅｎａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， 　　Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３００３， Ｈｅｎａｎ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｉｎ ｗｈｅａｔ ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｅｃｈｎｉｃａｌ ｓｕｐｐｏｒｔ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ， ｔｈｅ ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｅｎｅ Ｙｒ２４ ｗas ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ２２ ｓｔｒｉｐｅ ｒｕｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ cultivars， ４ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ cultivars， ａｎｄ ｗｉｌｄ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｂａｎｄ（１６５ｂｐ） ｗａｓ ｏｎｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ （３，６，１２）； ｂｕｔ ｔｈｅ ｂａｎｄｓ ｗｅｒｅ ｗｅａｋ． Ｎｏ ｔａｒｇｅｔ ｂａｎｄ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ４ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ． Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｌｄ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｏｒｉｇｉｎａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈａｒｄ ｗｈｅａｔ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｔｒｉｐ ｒｕｓｔ； ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒ； Ｙｒ２４ 　　 　　小麦条锈病是小麦锈病的一种，是我国小麦生产上分布广、传播快、危害面积很大的重要病害，流行年份给小麦生产造成严重危害甚至毁灭性打击［１］。小麦条锈病的大流行往往是由于新生理小种的出现，导致小麦品种抗性丧失。通过聚合育种将不同抗源的抗性基因聚合至一个个体培育出抗性更持久的新品种是长久防治小麦条锈病的根本措施。应用分子标记技术对抗病基因进行跟踪，实施分子标记辅助选择，可以快速有效地进行抗源累加，把多个抗病基因聚合在同一个品种中，从而大大提高育种效率［２］。研究通过对小麦条锈病的抗性基因分子标记Ｙｒ２４－２的筛选来考察一批抗性材料的抗性基因组成，为新品系的抗性遗传基础鉴定及持久抗性新品种选育提供理论及技术支撑。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　本研究所用的植物材料见表１、２。 　　１．２方法 　　小麦基因组ＤＮＡ的提取方法为ＣＴＡＢ抽提法［３］。 　　用前人已经报道的抗条锈病基因Ｙｒ２４的分子标记对上述２６个抗病、感病材料进行ＰＣＲ扩增［４，５］，来进行本研究（表３）。采用１５．０ μＬ反应体系：模板ＤＮＡ ３．０ μＬ，上下游引物各０．５ μＬ，１０×Ｂｕｆｆｅｒ １．５ μＬ，ｄＮＴＰ（２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）１．４ μＬ，Ｔａｑ酶（２．５ Ｕ／μＬ） ０．４ μＬ，ｄｄＨ２Ｏ ７．７ μＬ。ＰＣＲ循环参数：９４ ℃、５ ｍｉｎ；９４ ℃、１ ｍｉｎ，５３ ℃、１ ｍｉｎ，７２ ℃、１ ｍｉｎ，３５个循环；７２ ℃、１０ ｍｉｎ；４ ℃，保存。采用２％琼脂糖凝胶进行电泳，缓冲液为１×ＴＡＥ；电泳结果用凝胶成像系统进行拍照，保存。 　　２结果分析 　　２．１Ｙｒ２