实验七__猪圆环病毒病PCR诊断课件.pptVIP

实验目的： 1、了解PCR反应的原理、方法及操作步骤； 2、掌握猪圆环病毒PCR检测的方法； 什么是PCR？ 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。 PCR原理 PCR是一种选择性扩增DNA或RNA的方法，其基本原理是依据体内细胞分裂中的DNA半保留复制机理，以及在体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链DNA变成单链；单链DNA与人工合成的引物退火，以及在dNTP存在下，耐高温的DNA聚合酶使引物沿单链模板延伸成为双链DNA。高温变性，低温退火，适温延伸等３步反应循环进行，使目的DNA得以迅速扩增。 PCR原理 PCR技术在模板DNA、dNTP、Mg2+、合适Buffer等条件下，用耐热的Taq聚合酶代替DNA聚合酶，用合成的DNA引物代替RNA引物，经过DNA变性、引物与模板结合（复性）和延伸3个步骤的反复循环 （25?30次）过程，使目的DNA呈指数扩增 。 反应程序 变性：93-94℃ 2min 变性：93-94℃ 30s 复性：55-65℃ 30s 延伸：72 ℃ 30s 延伸：72 ℃ 2min PCR product 标准的PCR反应体系 10×扩增缓冲