人肺腺癌a549细胞hrsirr现象分子机制的体外研究-molecular mechanism of hrs irr in human lung adenocarcinoma a549 cells in vitro.docxVIP

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2018-05-30 发布于上海
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人肺腺癌a549细胞hrsirr现象分子机制的体外研究-molecular mechanism of hrs irr in human lung adenocarcinoma a549 cells in vitro

目录英文缩写词表1中文摘要3Abstract4前言6材料与方法8实验结果16讨论20结论22参考文献23综述26附录34致谢35英文缩写词表英文缩写HRS英文全称Low-dosehyperradiosensitivity中文名称低剂量超敏感性IRRIncreasedradioresistance增强的辐射抵抗3dH2OBSAWaterdistillatedthreetimesBovineSerumAlbumin三蒸水牛血清白蛋白DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜DNADSBDNAdouble-strandbreakDNA双链断裂RPMI1640RoswellParkMemorialInsitute1640RPMI1640培养基EDTAEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟DAPI4,6-Diamidino-2-phenylindole4,6-二脒基-2-苯基dihydrochloride吲哚二盐酸盐FITCFluoresceinIsothiocyanate异硫氰酸荧光素APAmmoniumPersulfate过硫酸铵TEMEDTetramethylethylenediamine四甲基乙二胺PIPropidiumIodide碘化丙啶PBSPhosphate-BufferedSaline磷酸盐缓冲溶液HRPHorseradishperoxidase辣根过氧化物酶RNaseARNAenzymeARNA酶ASDSSodiumdodecylsulphate十二烷基硫酸钠TBSTrisbufferedsalineTris缓冲液WesternblotWesternblot免疫印迹法GyGray戈瑞gGram克mgMilligram毫克μgMicrogram微克LLitre升mLMillilitre毫升μLMicrolitre微升hHour小时minMinute分钟rpmRevolutionsperminute每分钟转速人肺腺癌A549细胞HRS/IRR现象分子机制的体外研究华中科技大学同济医学院附属协和医院肿瘤中心硕士研究生陈其田导师程晶教授中文摘要【目的】探讨人肺腺癌A549细胞HRS/IRR现象的分子机制。【方法】用0~1.0Gy的6MV-X射线照射处于对数生长期的A549细胞后，Phospho-histoneH3-FITC/PI双染流式细胞仪检测M期细胞比例，WesternBlot实验检测Chk2及Phospho-Chk2（Thr387）蛋白的表达，γ-H2AX焦点实验检测DNADSBs的修复效率。【结果】在M期细胞下降明显的时间点（照射后2h），与未照射组相比，0.1Gy和0.2Gy组M期细胞无明显变化，0.3Gy、0.5Gy和1.0Gy组M期细胞比例明显下降。照射后1h，Chk2激酶在0.1Gy、0.2Gy组未见明显活化，0.3Gy组开始活化，0.5Gy、1.0Gy组与0.3Gy组的活化水平相比无明显变化。在照射后1～6h内，0.2Gy组DNADSBs的修复效率低下，0.5Gy和1.0Gy组DNADSBs修复效率较高。【结论】早期G2/M检查点阻滞和DNADSB的修复效率可能是A549细胞的HRS/IRR现象的主要发生机制，Chk2可能是调控早期G2/M检查点的关键蛋白。【关键词】HRS/IRR；Chk2激酶；早期G2/M检查点；DNADSBsThestudyofthemolecularmechanismsofHRS/IRRphenomenoninhumanlungadenocarcinomacellA549invitroDepartmentofoncology,TheUnionHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnologyMasterCandidate:ChenQitianSupervisor:Prof.ChengJingAbstract【Objective】TostudythemolecularmechanismsofHRS/IRRphenomenoninhumanlungadenocarcinomacellA549invitro.【Methods】AfterirradiatedexponentiallygrowingA549cellswith6MV-Xatdosesof0-1.0Gy,theproportionofMphasecellwasobservedbyflowcytometrywithPhospho-histoneH3-FITCandPIstaining,Chk2Thr387activationw