生物第一章基因工程课件浙教版选修3.pptVIP

1．在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。 简述获得转基因发光玫瑰植株的完整技术流程。 侵 染 荧光基因 含kan质粒 重组质粒 土壤农杆菌 含重组质粒土壤农杆菌 A 构建 导入 B 培养选择 转基因发光植株 再生植株 愈伤组织 离体玫瑰叶片组织 C 诱导选择 分化 D 检测 （1）A过程需要的酶有 。 （2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是 。 （3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入 。 （4）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用 作为探针。 限制性内切酶和DNA连接酶 具有标记基因；能在宿主细胞中复制并稳定保存 卡那霉素 放射性同位素标记的荧光基因 第1页/共12页 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。根据图示,判断下列操作正确的是（ ） A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 B．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割 D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 A 第2页/共12页 （山东）2.继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。 （1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是 。 （2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入 中，原因是 。 （3）通常采用 技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。 （4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在 小鼠的 细胞中特异表达。 （5）为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠体细胞的 转入 细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。该技术称为 。 显微注射技术 受精卵 （或早期胚胎） 受精卵（或早期胚胎细胞）具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞表达 DNA分子杂交（核酸探针） 膀胱上皮 去核的卵 核移植（或克隆） 细胞核 第3页/共12页 对某一DNA进行酶切，用A限制性内切酶酶切时，得到1个DNA片段，用B限制性内切酶酶切时，得到3个DNA片段，若同时用A、B限制性内切酶酶切时，得到4个DAN片段，则可判断该DNA有 个A限制性内切酶切点，有 个B限制性内切酶切点。 1 3 第4页/共12页 第一步：获取目的基因 （目的基因的序列已知） ①化学方法合成目的基因 ② PCR(聚合酶链式反应) 扩增目的基因 2、从基因文库中获取目的基因 （目的基因的序列未知） 1、人工合成目的基因 (根据已知蛋白质的氨基酸序列直接合成) 第5页/共12页 （1）来源： （2）作用： 原核生物(主要) 识别和切割DNA分子内特定核苷酸序列 即:一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 （3）特点： 专一性(特异性) 1、限制性核酸内切酶 磷酸与脱氧核糖之间的磷酸二酯键 （4）作用部位: （5）作用结果: 产生黏性末端或平末端 第二步：形成重组DNA分子 第6页/共12页 2、“分子缝合针” ——DNA连接酶 （1）作用： 连接DNA片段间的磷酸二酯键，将外源基因和载体连接在一起 （2）常用种类： ①E.coli DNA连接酶： 来源：大肠杆菌 作用：只连接黏性末端 ②T4 DNA连接酶： 来源：T4噬菌体 作用：连接黏性末端、平末端 DNA连接酶 比较 DNA聚合酶 第7页/共12页 3、“分子运输车” ——运载体 ⒈载体需要的条件： 　⑴能在受体细胞中自主复制、表达并稳定保存 　⑵有1~多个限制酶切点，以便与外源基因连接　 ⑶