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第三章 酶的结构与功能 第一节 酶催化功能的结构基础 一.酶的氨基酸组成的测定 1.水解 2.组成分离与分析 3.氨基酸组成分析 二.酶的一级结构的测定 1.肽链片断化 2.肽链片断的分离纯化 3.肽链片断的序列分析 (1)N-末端的测定 (2)C-末端的测定 (3)序列分析 4.酶总序列的测定 5.二硫键的定位 三.酶二级结构测定 1.酶的溶液构象研究法 (1)紫外差光谱 (2)荧光光谱 (3)圆二色光谱 (4)分子振动光谱 四.三级结构的测定 1.X射线衍射 2.三维核磁共振 五.酶的四级结构的测定 1.亚基数目与种类 2.亚基间的结合与排列 3.多亚基意义 六.活性中心的测定 1.酶的活性中心 特点: (1)活性部位在整个酶分子中只占很小的一部分 (2)活性部位是具有三维结构的裂隙 (3)酶的活性部位并不是和底物的形状正好互补的 (4)底物和酶活性部位是通过次级键结合的 (5)活性中心的裂隙具有高度疏水性 (6)活性部位构象上的柔性 2.研究酶活性部位的方法 (1)共价标记 ①非特异性共价标记 a.色氨酸残基的化学修饰 b.组氨酸残基的化学修饰 c.巯基的化学修饰 d.酪氨酸残基的化学修饰 e.精氨酸残基的化学修饰 f.羧基的化学修饰 g.氨基的化学修饰 ②特异性共价标记 一些酶活性部位的氨基酸顺序 (2)亲和标记 ①Ks型不可逆抑制剂 ②Kcat型不可逆抑制