浙科版生物选修1实验1 《大肠杆菌培养和分离》之二[最新].ppt

微生物(microorganism) 结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。 例：酵母、霉菌、细菌、放线菌、病毒和小型原生动物等等 微生物的利用： 抗生素；酒；腐乳；污水治理…… 历史小资料 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究，法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。 大肠杆菌的培养与分离 一、大肠杆菌（E. coli） 培养基（culture media） 按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 提供微生物生长的条件： 合适的温度：25-37℃ 合适的pH：细菌 6.5-7.5 中性偏碱 真菌 5.0-6.0 中性偏酸 营养成分：含有碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。 LB培养基的配方 琼脂？ 培养基的分类 液体培养基 半固体培养基 固体培养基 选择培养基（抑制不需要的微生物生长） 酵母菌、霉菌——青霉素 金黄色葡萄球菌——高浓度食盐 鉴别培养基 大肠杆菌——伊红-美蓝培养基 无菌技术 消毒的方法 灭菌的方法 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌 160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌 100kPa、121 ℃下 维持15-30min。 高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有三： 1、湿热灭菌时菌体蛋白容易变性； 2、湿热穿透力强； 3、水蒸汽变成水时可放出大量热增强杀菌效果，因此，它是效果最好的灭菌方法。 灭菌锅 检查水位 设定高压温度及时间，121℃ 20min 放入待灭菌物品 加热， 并打开放气阀排冷空气 关闭放气阀继续升温升压 待温度降低至80℃以下开盖，取出物品烘干 无菌技术操作要点 1、实验操作空间,操作者的衣着和手 —— 2、微生物培养的器皿用具和培养基等 —— 3、为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作应在 进行。 4、实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 …… 准备阶段 称量 液体LB培养基的配方 固体LB培养基 每100ml 液体LB培养基中加入2g琼脂，摇匀，灭菌。 3. 进行恒温培养时，为什么要将平板倒置？ 小结 1 什么是微生物？有哪些应用？ 2 培养基的基本营养成分及其配制方法 3 无菌技术：消毒和灭菌（高压蒸汽灭菌法） 4 微生物培养的基本程序（倒平板技术） 微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必须从中进行分离。在保藏菌种时不慎污染时也需予以分离。 怎样纯化分离我们需要的大肠杆菌呢？ 怎样确保大规模培养繁殖起来的细菌是一个纯种群体呢？ 菌落：单个细菌细胞在固体培养基上培养10--20小时后，会繁殖成许多个细菌细胞。这些细胞紧紧聚集在一起，形成菌落。 每一个细菌产生一个菌落。 不同细菌的菌落形态的区别体现在大小、形态、隆起、边缘、表面状况、质地、颜色、透明度等方面。　 将待分离样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。 平板划线分离法 涂布分离法 培养皿壁上不能沾有培养皿，否则容易污染。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 答：恒温培养时，培养基的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会是水蒸气凝结成水滴留在盖上；如果正放培养皿，则水分形成的水滴回落到培养基的表面并且散开。如果培养皿已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。因此，恒温培养时，培养皿必须倒置。 大肠肝菌的分离 微生物的接种技术： 将一种微生物移接到另一灭菌培养基上的过程。 例如：将液体培养基中的大肠杆菌接种到固体培养基上，以便于进行分离。 微生物的分离技术： 稀释 涂布分离法 平板划线分离法 稀释法 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 1.为什么在操作的第一步