作物育种14分子标记辅助选择（2学时）知识介绍.pptVIP

(GC)n (CG)n (CG)n (GC)n ISSR引物有两种类型：1）直接用简单重复序列本身作引物；2）利用简单重复序列的本身在3ˊ或5ˊ末端加上2～4个锚定碱基作为引物，从而克服有的简单重复序列本身作为引物扩增时产生带型模糊现象。 基本原理：STS是指基因组中长度为200-500bp，且核苷酸顺序已知的单拷贝序列，通过PCR可将其专一扩增出来。其基本原理是，依据两端序列，设计合适的引物，进行PCR扩增，电泳显示扩增产物多态性。 STS标记的主要特点：（1）标记来源广，数量多；（2）共显性遗传，可区分纯合子和杂合子；（3）技术简便，检测方便；（4）与SSR标记一样，开发依赖于序列分析及引物合成，成本较高；（5）多态性常常低于相应的RFLP标记。 2.6 Sequence tagged site（STS，序列标定位点） 基本原理：染色体基因组水平上某个特定位置单碱基的置换、缺失、或插入引起的序列变异。 STS标记的主要特点：（1）标记来源广，数量多；（2）高度稳定； （3）直接产生基因表达或蛋白的变化； 2.7 single nucleotide polymorphism （SNP，单核苷酸变异） 基本原理：功能性分子标记基于功能基因基序 （motif）中功能性单核苷酸多态性（SNP）位点开发 而成 主要特点（1）更有效地固定群体中的等位 基因；（2）有助于控制平衡选择；（3）有助于筛选 自然群体及育种群体中的等位基因；（4）在育种中有 助于组合影响相同或不同性状的等位FM；（5）有助 于构建连锁的FM 单倍型。 2.8 功能性分子标记 标记名称 RFLP RAPD AFLP SSR ISSR SCAR STS CAPs 主要原理 限制酶切Southern杂交 随机PCR扩增 限制性酶切结合PCR扩增 PCR扩增 随机PCR扩增 特异PCR扩增 特异PCR扩增 PCR扩增产物限制性酶切 多态性水平 中等 较高 非常高 高 高 中等 检测基因组区域 单/低拷贝区 整个基因组 整个基因组 重复序列 重复序列间隔的单拷贝区 整个基因组 单拷贝区 整个基因组 可靠性 高 中 高 高 高 高 高 高 遗传特性 共显性 显性/共显性 共显性/显性 共显性 显性/共显性 共显性 显性/共显性 共显性 DNA质量要求 高，5-30μg 中，10-100ng 很高， 50-100ng 中， 10-100ng 中， 2-50ng 中， 5-10ng 高， 50-100ng 实验周期 长 短 较长 短 短 短 短 短 开发成本 高 低 高 高 低 高 高 高 （一）与性状基因连锁的分子标记筛选 三、 分子标记辅助选择育种的要点 构建遗传图谱，首先要选择合适的亲本及分离群体，而且亲本之间的差异不宜过大，否则会降低所建图谱的准确度和适用性。 用于分子标记的遗传作图群体可分为两类： 暂时性分离群体，包括F2群体、BC群体、三交群体等 永久性分离群体，包括重组自交系群体、加倍单倍体群体等 1)构建作图群体 F2 Population Genetic map Field evaluation Genotype AA : Aa : aa (1 : 2 : 1) Field evaluation F1 Parent 1 Parent 2 x aa AA (Aa) x F2 (AA : Aa : aa) 1 : 2 : 1 F3 Types of mapping population Backcross Population F1 Parent 1 Parent 2 x BC1F1 x KDML105 BC4F1 x KDML105 BC2F1 x KDML105 %Similarity : 100 %Similarity : 0 BC3F1 x KDML105 x KDML105 Genetic map Field evaluation aa AA (Aa) (aa) (Aa : aa) 1 : 1 (Aa : aa) 1 : 1 (aa) (aa) (aa) (aa) Genotype Aa : aa (1 : 1) 育种新技术 细胞工程育种 作物转基因育种 分子标记辅助选择育种 新品种 亲本材料 育种的任务 创造可遗传的变异 选择和固定变异 1. 杂交育种 2. 杂种优势利用 3. 诱变育种 4. 远缘杂交 5. 多倍体育种 6. 轮回选择 7. 单倍体育种 8. 引种与驯化 常规育种方法 局限性 预见性差 效率低 (表型选择为主) 周期长 杂交育种流程图和所需年限 创造可遗传的变异 选择和固定变异 亲本材料 新品种 转基因育种 分子标记辅助育种 细胞工程育种 分子标记辅助选择育种 小麦紫芽鞘与绿芽鞘 1