分子育种学课件从分子育种学实验4-2015讲解材料.pptVIP

赵海军（副研究员） hjzhao@zju.edu.cn目的 了解标记辅助选择的原理 掌握质量性状—水稻低植酸性状的标记辅助选择技术;分子标记辅助选择（Marker Assisted Selection）概念 根据与目标性状紧密连锁的分子标记，选择具有控制目标性状基因的理想植株，即利用分子标记对育种材料进行选择。 ;应用前提 完成分子标记定位后，利用与目标性状相关基因紧密连锁或表现共分离关系的分子标记，对选择个体进行目标区域以及全基因组筛选。 相对常规育种方法其具有以下优点： 克服表型鉴定的困难。不易观察或易受环境影响、表现不稳定、直接选择比较困难的性状 早期选择。可在早代就对目标基因进行准确、稳定的选择 可同时选择多个性状及控制单一性状的多个等位基因。 加速育种进程，提高育种效率。;应用实例-低植酸水稻的分子标记辅助选择;20多个lpa突变体，5个非等位基因 Liu, et al., Theor Appl Genet, 2007 114(5): 803-814;0;植酸相关基因的图位克隆;Tan et al, 2013;传统分子标记开发;秀水110 低植酸突变基因克隆（OsMIK; Zhao et al. 2013);操作步骤;1.2 PCR配制与反应条件;制胶：含EB（0.5ug/ml）2%琼脂糖。 上样：凝胶完全聚合后拔出梳子，加入0.5×TBE电泳缓冲液。 电泳：点样完毕后接通电源，3-5V/cm电泳至溴芬兰至胶板底部。 用成像系统拍照或在紫外透视仪上观察并记录实验结果。;二、表型鉴定 稻米无机磷检测：每组八份，与基因型检测材料一一对应。;水稻种子无机磷检测步骤： 1）健康饱满的种子直接置于96孔板中，加入200μL的提取液（0.4M HCl），室温过夜浸提。 2）次日，取10μL浸提液于96孔板中，依次加入90μL蒸馏水和100μL显色剂，室温下静置0.5h后肉眼比色。 3）每份材料检测8粒种子，如全部无色为野生型；全部显蓝色为突变型（高无机磷）；8粒中部分显蓝色则为杂合型。 显色剂由3M浓硫酸、2.5%(W/V)的钼酸铵、10%(W/V)的抗坏血酸(贮于4℃)和蒸馏水按1:1:1:2体积比配制而成，现用现配。;;结果记录;Thank you !