c-2c2-h-2c2-型锌指蛋白——znfd的生物学功能初探.pdfVIP

中文摘要 C2H2型锌指基因是高等动物基因组中最大且最复杂的基因超家族，在人与小 鼠基因组中拥有数百个成员。本实验室使用生物信息学分析，并结合NCBI数据库 筛选得到一人源锌指基因ZNFD，基因号为NM 信息学方法分析，结果表明ZNFD为C2H2型锌指蛋白的一员，该锌指基因尚未见 相关研究，故本实验室对该基因展开了以下几个方面的初步研究。 序鉴定ZNFD基因序列的正确性。利用生物信息学方法对ZNFD基因和蛋白进行 eDNA由5个外 分析，表明ZNFD基因位于第5号染色体，定位在5q23．1。ZNFD 显子和4个内含子组成，含有990bp的开放阅读框，编码一个由329个氨基酸组 在前列腺、睾丸、脑、胰、子宫中表达，且睾丸和脑组织中表达量较高。通过生 物信息学软件CLUSTALW分析7种物种的ZNFD基因的同源性，分析表明目的 蛋白的17．260aa有较高的保守性。 ZNFD蛋白定位于细胞核。同时为了鉴定ZNFD蛋白的N端氨基酸序列与锌指模 序对ZNFD蛋白细胞核定位的影响，分别构建了一系列截短型ZNFD与绿色荧光 明了ZNF结构域对于ZNFD蛋白的核定位不是必须的。 大量研究证明ZNF蛋白多为转录因子，因此，本文进一步对ZNFD在特定的 信号通路中是否有转录调控作用进行了分析。运用Dual．荧光酶报道基因分析系统 件，该质粒专门用来监控蛋白激酶C转导路径的转录调控作用。这说明ZNFD可 能作为蛋白激酶C信号途径的转录激活因子来介导调控细胞的一系列功能。另外， 串联亲和纯化(TAP)为一种两步亲和纯化方法，该方法适用于分离类似生理条件 中文摘要 CaH2型锌指蛋白—-zNFD的生物学功能初探 下的蛋白互作复合体，因此我们构建了TAP．ZNFD真核表达载体，为后续寻找 ZNFD互作蛋白奠定基础。 关键词：ZNFD，C2H2型锌指蛋白，APICPMA)，转录激活 作 者：雷陈 指导老师：王明华 吴士良 ll Initial oftheFunctionofZNFD--aZinc Protein Abstract C2H2-type Exploration Finger Initial oftheFunctionofZNFDma Exploration Zinc Protein C2H2—-typeFinger Abstract zinc areoneofthe andmost C2H2 finger(C2H2-ZNF)geneslargest complexgene in inmetazoan hundredsofmembersthehumanand super-families genomes，with mouse anovelhumanzinc ZNFD genome．Wegot fingergene by ID 1．The andNCBIdatabase is