caco3对青枯病菌生长影响及土壤中青枯病菌定量pcr分析.pdfVIP

摘要 CaC03对青枯病菌生长的影响及土壤中青枯 病菌定量PCR分析 微生物学专业硕士研究生：李洪 指导教师：李振轮副教授 (摘要) 烟草青枯病是由青枯菌砌氐fD，lJ【口sD肠一口ce口删m引起的毁灭性土传病害，对烟草质量和产 量影响较大，其防治非常困难。因此，本文主要从药敏试验，无机盐碳酸钙及氯化钙对青枯 菌的影响和定量检测土壤青枯菌方面进行研究，探讨最佳药效药物，碳酸钙、氯化钙与青枯 菌的关系及该菌在土壤中的定量PCR分析，为深入了解青枯菌在土壤中的发生机制及防治提 供理论依据。实验结果如下： 半选择培养基(PCCG)和聚合酶链式反应(PCR)技术的结合以分离源自四川省达州市白肋 烟茎秆中的青枯菌，并对其生化型做出鉴定，结果分离得到23株青枯菌，均为生化III型。然 后分别用叶枯唑，乙蒜素，农用硫酸链霉素，石硫合剂，47％聚赖氨酸，99％曲酸处理该病菌， 并建立对照，研究烟草青枯病菌对几种杀菌剂的敏感性，筛选出性能优良的适用药剂。结果 表明：所分离菌株对乙蒜素，农用硫酸链霉素，叶枯唑敏感，其中乙蒜素效果最好，对烟草 青枯病菌有良好的防治效果。 实验室通过接种青枯菌于21个含有不同粒径和不同比例碳酸钙的土壤样品及体外研究 乎不能生长，且Ca2+对青枯菌的生长有一定的抑制作用，抑制率可达到78．17％。碳酸钙与青 枯菌生长量密切相关，碳酸钙粒径大小与青枯菌生长量呈正相关，合适粒径的碳酸钙能使土 壤pH增加到8．O和提高土壤中交换性钙离子浓度，而pH的增大和钙浓度的增大是抑制青枯 菌生长的主要原因，最适碳酸钙粒径应小于l嗍。 对青枯菌在不同浓度的氯化钙作用下所产果胶酶活性测试，结果表明产胞外果胶酶活性 与所加氯化钙浓度成反比。经方差分析，外源钙与青枯菌产胞外果胶酶活性呈显著负相关 (FF嘶t)。 对青枯菌在不同浓度的氯化钙作用下所产胞外多糖测试，结果表明氯化钙对青枯菌所产 胞外多糖总量和单产量影响甚小。所有处理与对照相比无显著差别。 西南大学硕士学伊论文 G赋n 为实现田间土壤烟草青枯菌的早期检测，建立了土壤中烟草青枯病菌的sYBR I荧 光定量PCR检测方法。以含331bp序列的重组质粒为荧光定量PCR的标准品，构建定量标准 曲线，对种植烟草的不同层次土壤检测青枯菌数量。结果表明，青枯菌检测范围在4．16×103— 烟草大田中，发病植株根际土壤青枯菌量大于其它土壤层次中的含菌量，轮作玉米土壤中非 根际青枯菌量大于根际土壤中菌量。 关键词：烟草青枯病菌定量分析钙果胶酶多糖 Ⅱ AbsIracC CarbonateonGrowthof EfkctofCalcium Detectionof 尺以瓜fD耽f以sD励耽口ce以厂M7and in SoilwithReal．time 尺口厶幻耽砌sD励刀口ce口儿zm PCR Assay forMaster LI Applican Degree：Hong LIZhenlun Supervisor：PrOf．Associate AbstI．act disease Tobaccobacterial、析lt．w扯chisal【i11dofbac