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文献翻译 用探针为基础的胶体金免疫层析法快速检测渔业产品样本中的双鞭甲藻神经毒素 Yu Zhou*,Feng-Guang Pan,Yan-Song Li,Yuan-Yuan Zhang,Jun-Hui Zhang,Shi-Ying Lu,Hong-Lin Ren,Zeng-Shan Liu Key Laboratory of Zoonosis research,Ministry of Education,Institute of Zoonosis,Jilin University,Changchun 130062,PR China Received 23 November 2008，Received in revised form 18 January 2009，Accepted 26 January 2009，Available online 2 February 2009 海洋生物神经毒素由浮游赤潮藻，至少有九个同族组成，根据的聚醚骨干结构。在K.brevis的主要毒素A型PbTx -1，-7和-10和B型PbTx -2 ，-3 ，-5 ，-6 ，-8和9（ Wilson等2008年数以百万计的鱼类死亡，并贝类中毒（杰罗姆等， 2007） 。因此，有必要发展的分析方法确定PbTxs。这有助于支持两个基础科学研究和海鲜.Up的支持，现在已经提出了几个生物样品PbTxs的免疫小鼠生物，基于免疫检测（卡特里特人， 1993年;波利伊特尔1995年 Marketal ，2002年，受体结合试验（VanDolah等，1994） ，细胞毒性试验（Manger等，1995，液相色谱仪加上质谱和串联质谱法（ LC-MS/MS ） （晃等人，2003年王等人， 2004年 Wilson等人，2008年） ，功能药理基础实验（劳伦斯等，2003 ）直接化学分析（迪基等，1999） LC-MS/MS法已被证明是一个很好的新型干法直接测定的分析方法，以及最近提出一个普遍海洋毒素（ Plakaset人，2002年）的分析方法。然而，这种方法需要昂贵的设备和熟练的分析师，样品制备是劳动密集型时间方法实验室的科研限制。因此，有必要制定一个快速和经济的方法检测PbTxs. 最近，我们已经明显的特异性单克隆抗体（数据提交到另一个杂志）PbTxs.在这个研究中，我们描述一步基于胶体金免疫层析快速检测PbTxs的发展硝基纤维素膜纸Millipore.Filter公司 。羊抗鼠IgG抗体与牛血清（BSA）购买PbTx -1 ， PbTx -2 ， PbTx -3 ， PbTx -9 ，雪卡（纯度≥ 98 ％ HPLC法） ，冈田酸，微囊藻毒素LR和（纯度≥ 95 ％ HPLC法）Sigma。一种反PbTx单克隆抗体在我们的实验室中氯金酸（ HAuCl）和柠檬酸钠上海化学试剂（上海，中国） 。在这项研究中使用的缓冲包括0.05 M的钠磷酸盐缓冲液（PBS ， PH7.4 ）和试剂为分析纯，所有的实验用双蒸馏水根据王某等人描述的过程，制备胶体金颗粒（20nm）（ 2005年）简言之， 0.01％ l00mL氯金酸溶液（）在250 mL锥形煮沸，然后1.8mL 的1％柠檬酸钠溶液加入不断搅拌。溶液颜色改变酒红色45秒，胶体金溶液 0.1M 的碳酸钾将胶体金溶液的pH值调整8.5.一边轻轻搅拌，一边加入0.5毫升纯化抗毒素单克隆抗体（0.5毫克毫升）5毫升1％ BSA溶液30分钟封锁，在3015000转离心0分钟金颗粒悬浮于5 mL的稀释液[20的Tris /HCl缓冲液（pH值8.2）中包含1 ％ （W / V）牛血清白蛋白稀释液在520 nm的光密度调整到5.0 ，然后存放在4摄氏度使用测试设备的免疫试验装置的组成如下：硝基纤维素膜切成段（1.5厘米×0.5厘米克的羊抗鼠IgG （控制线）和1.75 毒素牛血清白蛋白结合（试行） （0.05 M的钠磷酸盐缓冲液PBS，pH值7.4） ，分别适用于靠近一端（顶部）测试线和控制线之间的距离是约5 mm试纸干燥在37摄氏度30分钟。剩余的蛋白质结合位点的膜在室温下浸泡在PBS30分钟含1％ BSA条被封锁洗净晒干，然后在干燥器中4摄氏度免疫层析检测PbTx通过相应的测试标准毒素的解决方案设备底部（50公升）样本进行了检测。 10分钟后，取出试纸，剩余的液体样品交叉反应的PbTx试纸还分别测定样品中含有100 ngmL - 1 PbTx -1 ， PbTx -3 ， PbTx -9 -1 ，雪卡（CTX -1 ）冈田酸（OA），微囊藻毒素LR（MC-LR）和DTX）毒素试纸评估交叉反应扣球软体动物提取物无毒拾贝和牡蛎牡蛎锦葵购买从本地.动物组织二甲基亚砜（50％， W / V被彻底打乱 ，然后在1500 离心