扬州大学《植物细胞工程》 第三篇 章 植物组织培养再生植株.pptVIP

Artificial seed production from encapsulated PLBs regenerated from leaf base of Vanda coerulea Sarmah DK et al., 2010, Current Science THE END 通过器官发生形成再生植株大体上有三种方式: 第二种方式为先根后芽; 第三种方式是在愈伤组织的不同部位形成芽和根， 再通过维管组织的联系形成完整植株。 第一种方式是先芽后根; Rapid Multiplication by Transfer of Cultures （一）胚状体(embryoid )的概念 胚状体(体细胞胚, Somatic embyo)：离体培养中，没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程形成的胚的类似物。 （二）体细胞胚的发生途径 1、从外植体直接发生 2、经胚性愈伤组织发生 3、悬浮培养细胞发生 （三）体细胞胚的发生过程: （四）胚状体（embryoid）特点： 不同于合子胚，因为它不是两性细胞融合产生; 不同于孤雌/雄胚，因为它不是无融合生殖的产物； 不同于器官发生方式形成的茎芽和根，因为它经历 了与合子胚相似的发育过程且成熟的胚状体是双极 性结构。 （五）影响体细胞胚发生的因素 1、生长素（2,4-D）有利于诱导体细胞胚的形成，但是抑制体细胞胚的发育。 2、培养基中的氮源影响体细胞胚的发生频率。 3、不同基因型间体细胞胚的形成能力有差异。 体细胞胚发育再生成植株有两个明显的特点： 一是体细胞胚具有双极性（double polarity）； 二是体细胞胚形成后与母体的维管束系统连系 较少，即出现所谓的生理隔离（physiological isolation）现象。 第三章 植物组织培养再生植株 植物组织培养再生植株的途径 1 2 3 植物组织与器官培养基本步骤 1、外植体的选择，建立无菌培养体系 2、无菌培养体系的快速增殖 3、器官发生，形成不定芽或胚状体 4、生根培养与试管苗的移植。 第一节、无菌培养体系的建立与增殖 外植体的选择、灭菌、接种、培养 一、无菌培养体系的建立 二、外植体的脱分化——愈伤组织诱导 （一）愈伤组织的形成 1、诱导期（起始期）：分裂准备期； 2、分裂期：细胞从开始分裂到持续分裂的时期； 3、形成期：愈伤组织不再增殖，组织内部 出现“维管组织结节”或“分生组织结节”。 （二）愈伤组织诱导的条件 细胞分裂素：能够使已脱分化的细胞，或细胞团保持持续有丝分裂。 常用的细胞分裂素是激动素、玉米素和6-BA ，使用的浓度范围在0.1～10mg/L。 生长素和细胞分裂素对保持愈伤组织的快速生长是必要的，特别是两者结合使用时，能更强烈地刺激愈伤组织的形成。 二、外植体的脱分化——愈伤组织诱导 （三）愈伤组织的增殖 增殖途径——继代培养 继代培养（Subculture）——指培养组织在培养基上生长一段时间后，营养物质枯竭，水分散失，并已积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养。 Subcultures are usually performed every 3 to 6 weeks! （四）优良愈伤组织的特性 增殖能力旺盛； 分散性好，容易建立优良的悬浮系； 有利于再分化，或得再生植株。 二、外植体的脱分化——愈伤组织诱导 愈伤组织再分化成器官一般要经过三个生长阶段： 第一阶段是外植体经过诱导形成愈伤组织； 第二阶段是“生长中心”形成。当把愈伤组织转移到有利于有序生长的条件下以后，首先在若干部位成丛出现类似形成层的细胞群，通常称之为“生长中心”，也称为拟分生组织，它是愈伤组织中形成器官的部位； 第三阶段是器官原基及器官形成。 第二节 器官发生 离体器官发生 :指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根（adventitious roots）、不定芽（adventitious shoots）、类原球茎(PLBs)等器官的过程。 由胚性愈伤组织产生胚状体（体细胞胚）:胚性愈伤组织的表面是高度分生组织化的细胞团，其表面可以产生大量的胚状体。 生根培养 对于上述途径所获得的芽，在大多数情况下均需要转移到生根培养若进行生根诱导发育成完整植株。 生根培养基一般要求降低矿物营养的浓度，提高生长素的浓度。具体应根据植物种类而定。 炼苗（驯化）：移栽前将培养物不开口，移到自然光照下锻炼2-3d，让试管苗接受强光的照射，使其长得壮实起来，然后再开口炼苗1-2d，经受较低湿度的处理，以适应将来自然湿度的条件 。 试管苗驯化移栽——Transplantin