第2章原核基因表达及其调控.pptxVIP

（1）转录因素； （2）翻译因素； （3）蛋白质的稳定性； （4）胞外分泌的特性 一、原核生物的基因表达 ;要注意的关键名词术语: 1) 编码链（有义链，the coding strand）; 6) 转录单位（A transcription unit）; 2) 反义链（模板链，the template strand）; 7) 上游（Upstream）; 3) RNA聚合酶（RNA polymerase）; 8) 下游（Downstream）; 4) 启动子（A promoter）; 9) 转录起始位点?(Startsite); 5) 终止子（A terminator）; 10) 初始转录产物 A primary transcript ; 原核生物RNA聚合酶 大肠杆菌提取的RNA聚合酶：由五个亚基组成，分子量为 500 kDa。 核心酶（?2ββ’）：转录功能单位 全酶（?2 ??’?） （core enzyme） （holoenzyme） σ因子：参与识别特异的启动子 原核生物RNA聚合酶能被利福平（rifampicin）所抑制。 利福平与β亚基相结合，从而抑制酶的活性。 ;RNA聚合酶可形成1个中间管道;(二)、原核生物基因的翻译;起始因子Initiation factors (IFs) 可稳定自由状态的 30S 亚基；以及结合起始 tRNA到 30S-mRNA复合物上;二、 可调控启动子驱动的基因表达; E. coli用作受体菌的优势： （1）对其遗传学背景、分子生物学、生物化学和生 理学方面的了解较为深入； （2）很多目的基因能在E. coli中迅速而有效地表达； （3）其培养条件易于掌控，培养费用相对较低。。; 启动子：DNA分子中与RNA pol I发生特定结合的序列，启动转录过程。 启动子有强/弱之分。 E. coli的启动子： （1）-10 region：TATA box（Pribnow box） T77A76T60A61A56T82 （2）-35 region：为RNA pol I初始结合区。 T69T79G61A56C54A54; 非调控启动子：对细胞产生伤害 (1) 持续性地高水平表达某一目的基因会过分消耗宿 主细胞的营养和能源，最终造成致死效应; (2) 由于使宿主细胞处于生长的逆境，容易发生载体 质粒的丢失； (3) 非调控性地表达外源蛋白，容易受到蛋白酶的水 解作用，从而使最终的蛋白量并不高； (4) 形成不溶性的包含体蛋??。 ;（一）可调控启动子(Regulatable Promoters)： 大肠杆菌中已开发5种可调控启动子 (1) Plac 启动子：即 E. coli lac启动子; (2) Ptrp 启动子：即 E. coli trp启动子； (3) Ptac 启动子：由lac和trp组成的杂合启动子。 即 E. coli lac (-10 区) ＋E. coli trp (-35 区) (4) PL 启动子：基于噬菌体 ?的启动子； (5) Pt7 启动子：噬菌体T7 的基因10启动子 ; 可调控启动子的特征： （1）通过与阻遏蛋白的相互作用，提供一个 开关系统，使启动子能在特定条件下发 生关闭或者开放； （2）容易被大肠杆菌的RNA聚合酶全酶所识 别。;; lac 启动子： （1）lac启动子来源于大肠杆菌的乳糖操纵子，包括启动子、活化蛋白（catabolite activator protein, CAP）结合位点、操纵基因和lacZ组成。 （2） lac启动子受到阻遏蛋白（repressor）的负调控，而受到CAP和cAMP的正调控。其中CAP的正调控是通过增加启动子与RNA聚合酶的亲和性而起作用。 (3) lac 启动子由于与阻遏蛋白相结合而处于关闭状态，