蛋白质的结构、功能及分离纯化--0914.pptxVIP

（一）蛋白质的化学组成和分类 1、?? 元素组成 碳 50% 氢7% 氧23% 氮16% 硫 0-3% 微量的磷、铁、铜、碘、锌、钼 凯氏定氮：粗蛋白质含量=蛋白氮×6.25 2、?? 氨基酸组成 蛋白质是由20种L-型α氨基酸组成的长链分子;3、?? 分类 （1） 按组成： 单纯蛋白质：只含氨基酸成分；可以根据其物理性质进行分类 缀合蛋白质：氨基酸 + 辅基（配体）；可以按其非氨基酸成分进行分类 （2）按生物学功能： 酶、调节蛋白、转运蛋白、贮存蛋白、收缩和游动蛋白、结构蛋白、支架蛋白、保护和开发蛋白、异常蛋白。 ;（二）? 蛋白质分子的形状和大小;2 大小 少于50个氨基酸的低分子量多聚物称为肽，寡肽或生物活性肽，有时也称多肽。 多于50个氨基酸的称为蛋白质。 蛋白质分子量 = 氨基酸数目*110 ;蛋白质都有自己特有的天然空间结构，称为构象。 ? 一级结构：氨基酸顺序 二级结构：α螺旋、β折叠、β转角，无规卷曲 三级结构： 整个肽链（亚基）的形状； 四级结构 ：亚基之间的聚集形式。;（四）蛋白质功能的多样性;二 肽;（一） 肽键与肽链; 肽键的特性;肽键的结构特点： 酰胺氮上的孤对电子与相邻羰基之间形成共振杂化体。 肽键具有部分双键性质，不能自由旋转。 肽键具有平面性，组成肽键的4个原子和2个Cα几乎处在同一平面内（酰氨平面）。 肽键亚氨基在pH014内不解离。 肽链中的肽键一般是反式构型，而Pro的肽键可能出现顺、反两种构型．;肽 链;肽链中AA的排列顺序和命名;旋光性：一般短肽的旋光度等于其各个氨基酸的旋光度的总和。 肽的酸碱性质 短肽在晶体和水溶液中也是以偶极离子形式存在。 肽的酸碱性质主要取决于Ｎ端α－ＮＨ２和Ｃ端α－COOH以及侧链Ｒ上可解离的基团。 在长肽或蛋白质中，可解离的基团主要是侧链基团。;4） 原则：当溶液pH大于解离侧链的值，占优 势的离子形式是该侧链的共轭碱，当溶液pH小于解离侧链的值，占优势的离子形式是该侧链的共轭酸。 3. 肽的化学反应：肽的α-羧基，α-氨基和侧链R基上的活性基团都能发生与游离氨基酸相似的反应，如茚三酮反应、Sanger反应、DNS反应和Edman反应；还可发生双缩脲反应???含有两个或两个以上肽键的化合物与CuSO4碱性溶液发生反应生成紫红色或蓝紫色的复合物。氨基酸无该反应）。;（三）天然存在的活性肽;1 谷胱甘肽(GSH);GSH的功能;2、?? 短杆菌肽（抗生素） 由短杆菌产生的10肽环。抗革兰氏阳性细菌，临床用于治疗化浓性病症。 ? L-Orn—L-Leu—D-Phe—L-Pro—L-Val—L-Orn—L-Leu—D-Phe —L-Pro—L-Val ;3、?? 脑啡肽（5肽） Met 脑啡肽： Tyr—Gly—Gly—Phe—Met Leu脑啡肽： Tyr—Gly—Gly—Phe—Leu 具有镇痛作用。 ? 生物体内寡肽的来源： ①合成蛋白质的剪切、修饰 ②酶专一性逐步合成（如谷胱甘肽）、 ③动物肠道可吸收寡肽;4、肽类激素;一级结构：蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序 表示方法：N-末端向C-末端 维持力： 肽 键、 二硫键;（一） 蛋白质测序的策略 对于一个纯蛋白质，理想方法是从N端直接测至C端，但目前只能测60个N端氨基酸。 1、直接法（测蛋白质的序列） 两种以上特异性裂解法 N C A 法裂解 A1 A2 A3 A4 B 法裂解 B1 B2 B3 B4 ?;2、?? 间接法（测核酸序列推断氨基酸序列）;3 测序前的准备工作 1）蛋白质的纯度鉴定 纯度97%以上，均一。 ⑴ 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)要求一条带 ⑵ DNS—cl（二甲氨基萘磺酰氯）法测N端氨基酸 2）测定分子量，估算氨基酸残基数，确定肽链数 SDS 凝胶过滤法 沉降系数法;4 蛋白质测序的一般步骤 （1）测定蛋白质分子中多肽链的数目； （2）拆分蛋白质分子中的多肽链； （3）断裂链内二硫键； （4）分析每一多肽链的氨基酸组成； （5）鉴定多肽链的N末端和C末端残基； （6）裂解多肽链成较小的肽段； （7）测定各个肽段的氨基酸顺序； （8）确定肽段在多肽链中的顺序； （9）确定多肽链中二硫键的位置。;（二）N –末端和C-末端氨基酸残基的鉴定 1 N-末端分析 DNS-cl法：最常用，黄色荧光，灵敏度极高，