第二篇 章 基因工程的工具酶 基因克隆课件.pptVIP

第二章 基因工程的工具酶;有关的几个概念;Restriction endonucleases;;Restriction endonucleases;2、Ⅱ型限制性核酸内切酶;(2)Ⅱ型酶的识别与切割顺序II型酶的识别序列一般是4-6个碱基，也有6个以上的，但没有4个以下的，这些序列具有双重螺旋对称的结构形式，换言之，这些核苷酸对的顺序是呈回文结构。 ;①平末端（blunt/flush end/termini);②5`粘性末端（sticky/cohesive end/termini);③ 3`粘性末端;Cohesive ends ;Cohesive end;Recognition sequences;;（3）Ⅱ型限制性内切酶的一些特点;③酶切位点不同但产生相同的粘性末端:Bam HⅠ：G/GATCCBgl Ⅱ ：A/GATCTBcl Ⅰ ：T/GATCASau 3A ： GATC;（4）酶切位点的计算：;3、III型限制性内切酶;;三、限制性核酸内切酶的命名;;一、天然DNA的制备 ;2、天然DNA的提取 ;;二、DNA的纯化 ;;;去掉插入DNA中的EB;Extraction of EB with n-butanol;三、 DNA的浓缩 ;;四、限制性核酸内切酶反应;2、单酶切法;单酶切步骤; 3、双酶切法 ;4、部分酶切;4、部分酶切;5、DNA分子的限制性图谱; 部分酶切:   1.2 kb 1.5 kb 2.0kb 0.7kb;五 、影响核酸内切限制酶活性的因素;;第三节 DNA聚合酶 ;;;（1）以DNA聚合酶I为代表的“合成型”;;（3）逆转录酶类，以RNA作为聚合模板;DNA聚合酶;二、大肠杆菌DNA聚合酶I（全酶）;2、用途:用切口平移（缺口转移）方法标记DNA;;三、大肠杆菌DNA聚合酶I大片段（Klenow片段）;2、用途;四、T4噬菌体DNA聚合酶;2、用途;五、T7噬菌体DNA聚合酶;主要用途;六、Taq DNA聚合酶;2、用途;七、逆转录酶（依赖于RNA的DNA聚合酶）（reverse transcriptase）;用途