visfatin对大鼠肝脏胆固醇代谢及SREBP的调控作用.docVIP

　　visfatin对大鼠肝脏胆固醇代谢及SREBP2的调控作用 【摘要】 目的： 探讨visfatin对血浆胆固醇代谢和肝胆固醇合成的影响. 方法： 将空载体转染对照组（NC组）,大鼠visfatin基因真核表达质粒转染普通饲料组（NT组）和高脂组（HT）大鼠，并测定转染前后各组大鼠血浆胆固醇及肝脏HMG CoA还原酶和固醇调节元件结合蛋白 2（SREBP2）mRNA表达的变化. 结果： visfatin质粒注射3 d后，NT和HT组大鼠血浆胆固醇均较注射前明显下降［（1.61±0.18） vs（1.25±0.09）mmol/L和（2.37±0.11）vs（1.74±0.12）mmol/L，均Plt;0.05］；高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)也明显降低［（0.83±0.09）vs（0.56±0.09）mmol/L 和（1.32±0.09） vs （0.91±0.04）mmol/L, Plt;0.05］；NT和HT组大鼠SREBP2 mRNA表达均明显高于NC组［(0.37±0.06)，（0.36±0.07） vs （0.21±0.04），均 Plt;0.05］, NT组HMG CoA还原酶mRNA水平明显高于NC，HT组［（0.89±0.13） vs （0.37±0.07）和（0.55±0.16）, 均P＜0.05］，NC组与HT组无明显差异. 结论： visfatin可能通过促进SREBP2和HMG CoA还原酶表达来调节体内胆固醇代谢. 【关键词】 内脂素 胆固醇 HMG CoA还原酶 固醇调节元件结合蛋白 2 　　0引言 　　visfatin又称前B细胞克隆增强因子(PBEF)，是最近发现的一种脂肪细胞因子,也称为内脂素. 研究表明，visfatin具有类胰岛素作用，能够促进脂肪的合成与聚集［1- 2］. 目前的研究大多集中在visfatin与2型糖尿病、胰岛素抵抗、肥胖的关系，但其与胆固醇代谢的关系目前并不清楚. 固醇调节元件结合蛋白(SREBP2)与羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMG CoA还原酶）是主要的胆固醇生物合成通路的调控元件，与胆固醇代谢密切相关. 因此，我们通过构建大鼠visfatin基因重组真核表达质粒并导入大鼠体内，探讨visfatin过表达对肝SREBP2与HMG CoA还原酶表达的影响，从而分析其对胆固醇代谢的调节作用. 　　1材料和方法 　　1.1材料去内毒素质粒大量提取试剂盒（Omega公司）；Trizol（Invitrogen公司）；反转录酶MMLV，Taq DNA聚合酶（TaKaRa公司）；羊抗鼠visfatin多克隆抗体（Santa Cruz公司）；HRP标记的兔抗羊二抗（中杉金桥公司）；化学发光试剂盒（康成生物公司）；DYYIII稳压稳流电泳仪、双垂直板蛋白电泳槽（北京六一仪器厂）；半干转印迹电转系统，BIORAD Gradient Cycler PCR仪（Biorad）；日立7020型全自动生化分析仪；SD雄性大鼠15只（第三军医大学大坪医院实验动物中心）. 　　1.2方法 　　1.2.1pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒的构建本课题组前期构建，经DNA测序鉴定，导入基因无突变，构建成功. 　　1.2.2动物分组及处理将大鼠15只随机分为正常饮食pcDNA3.1(+)空质粒注射组（NC组, n=5）、正常饮食pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒注射组（NT组, n=5）和高脂饮食pcDNA3.1visfatin重组真核表达质粒注射组（HT组, n=5）. 各组大鼠喂养16 g/kg. 于注射前后72 h各取其空腹血，分离血浆，于第2次取血后处死大鼠取肝脏组织. 　　1.2.3HMG CoA还原酶和SREBP2表达测定用常规方法提取大鼠肝组织总RNA，用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）半定量测定肝HMG CoA还原酶和 SREBP2 mRNA，以βactin为内参. HMG CoA还原酶上游引物为：5′CCTGCGTGTCCCTGGTCCTA 3′；下游引物：5′CTTTGGGTTACTGGGTTTGG 3′. SREBP2上游引物：5′GGCTCTGGCCGCAATGTA 3′；下游引物：5′TGACCGAGGAGCGTGAGT 3′. βactin上游引物：5′ CCACTGCC GCATCCTCTTCCTC 3′；下游引物：5′ TCCTGCTTGCTGATCCACATCT 3′. 　　1.2.4其他指标测定采用Western Blot法测定血浆visfatin水平；血浆总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）在全自动生化分析仪进行测定. 　　统计学处理：各项数据资料以x±s表示，组内比较采