培训资料--消毒灭菌,肠道致病菌分离培养和抗酸染色.pptVIP

分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。 【实验原理】 细菌：卡介苗 （Bacillus Calmette-Guerin， BCG） 染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液 其它：接种环、酒精灯、载玻片、玻片夹等 　　 【实验材料】 1.细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2.染色 1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3 滴，在火焰高处（2-10cm）徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，加热3～5min，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30s～1min；用水冲洗。 3）复染：用碱性美兰溶液复染1min；用水冲洗后用吸水纸吸干。 3. 用油镜观察 【方法与步骤】（与革兰染色的差别） 【实验结果】 未染色 初染后 脱色后 复染后 初染 脱色 复染 石炭酸复红 盐酸酒精 碱性美兰 结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈蓝色。 【注意事项】 1. 无菌操作 2. 染色时间要充分 3. 初染时掌握好加热的温度，勿沸腾、干涸 4. 初染结束后需冷却后再用水冲洗 实验报告 内容：抗酸染色 一、目的 二、原理 三、材料 四、方法 五、结果（图） 六、注意事项 预习下周实验内容： 肠道致病菌的鉴定； 药敏试验； 内毒素的检测。 1.请将实验后的玻片放入前面的消毒缸中。 2.显微镜油镜头用擦镜液擦干净。 2.离开实验室之前请用肥皂洗手。 3.请值日的同学认真打扫。 * 实验二 三. 抗酸染色 一. 消毒灭菌 二. 肠道致病菌的分离培养 一、消毒灭菌 物理因素对细菌的影响 2. 化学因素对细菌的影响 （一） 物理因素对细菌的影响 高压蒸汽灭菌法 紫外线对细菌的影响 高压蒸气灭菌法 原理：蒸汽被限制在密闭容器内，随着热力 的作用压力不断升高，蒸汽的温度也 相应升高，在103.4kPa蒸汽压力下 时，温度可达121.3℃。维持15-20分 钟后可杀死细菌包括芽孢在内的所有 微生物。 高压蒸气灭菌器 1) 构造 高压蒸气灭菌器是一个双层的金属圆筒，两层之间盛水，外层坚厚，其上或前方有金属厚盖。盖旁附有螺栓，借以紧闭盖门，使蒸气不能外溢。 高压蒸气灭菌器上装有排气阀、安全阀，以调节器内压力，装有的温度计及压力表以示内部温度和压力。 器内装有带孔的金属搁板，用以放置欲灭菌对象。 高压蒸汽灭菌法 压力：1.05kg/㎡ 或103.425KPa 温度: 121.3℃ 时间：15-20min 完全杀灭细菌的繁殖体和芽孢 用途：适用于耐高温、高压，不怕潮湿的物品， 如敷料、 手术器械、药品、细菌培养基等。 2)使用方法 ①加水至锅内达规定的水平面，放入欲灭菌物品，把锅盖按对称的螺旋先后对称用力（切勿单个依次）扭紧，使锅盖确实均匀密闭。 ②用电炉加热，同时打开排气阀门，使器内冷空气逸出，待空气全部排出后，关闭排气阀。 ③继续加热并观察压力表，器内压力又逐渐升高，直到压力表指在所需数字（例如15磅）即调节热源，维持20～30min．可完全杀死细菌的繁殖体和芽胞。 ④灭菌时间到达后，停止加热，待压力自行下降至零时方可徐徐开放排气阀，排尽余气，打开锅盖，取出灭菌物品。 3)注意事项 ①检查排气活塞及安全阀门，特别是压力表的性能是否正常，以免发生危险。 ②灭菌物品不应放置过挤，妨碍蒸气流通，影响灭菌效果。 ③灭菌开始时必须将器内冷空气完全排除，否则压力表上所示压力并非全部是蒸气压力，灭菌将不彻底。 ④灭菌过程中及灭菌完毕，灭菌后切不可排气过急，突然打开排气阀门放气减压，以免瓶内液体外溢或者破裂。 全自动高压蒸汽灭菌锅 台式蒸汽灭菌器 BA-30 Systec D-200 2D 双门高压灭菌器 电热卧式圆形压力蒸汽灭菌器(型号YXQ-WY21-600) 全自动喷淋式高温高压调理杀菌锅 电脑全自动水浴式串联