三细胞生物学研究方法1.pptxVIP

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三细胞生物学研究方法1

第一节 细胞形态结构的观察方法;一、光学显微镜技术(light microscopy);显微镜和显微镜的分辨能力:;普通复式光学显微镜技术;荧光显微镜技术(Fluorescence Microscopy);激光共焦扫描显微镜技术 (Laser Scanning Confocal Microscopy);?相差显微镜(phase-contrast microscope) 将光程差或相位差转换成振幅差,可用于观察活细胞 ?微分干涉显微镜(differential-interference microscope) 偏振光经合成后,使样品中厚度上的微小区别转化成 明暗区别,增加了样品反差且具有立体感。适于研究 活细胞中较大的细胞器 ?录像增差显微镜技术(video-enhance microscopy) 计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活 细胞中的颗粒及细胞器的运动 ;双目显微镜;正置显微镜;荧光显微镜及其照片;共聚焦显微镜及其显微图像;激光共聚焦原理;暗视野成像原理;二、 电子显微镜技术;电镜与光镜的比较;电镜与光镜光路图比较;电子显微镜的基本构造;主要电镜制样技术;透射电镜及其图像;扫描电镜;扫描电镜及其图像;三、 扫描遂道显微镜;?装置:扫描的压电陶瓷,逼近装置,电子学反馈控制系统和数据采集、 处理、显示系统。 ?特点:(1)可对晶体或非晶体成像,无需复杂计算,且分辨本领高。 (侧分辨率为0.1~0.2nm,纵分辨率可达0.01nm); (2)可实时得到样品表面三维图象,可测量厚度信息; (3)可在真空、大气、液体等多种条件下工作;非破坏性测量。 (4)可连续成像,进行动态观察 ?用途:纳米生物学研究领域中的重要工具,在原子水平上揭示样本表面的结构。 ;第二节 细胞组分的分析方法;一、 离心分离技术 ;差速离心:分离密度不同的细胞组分 ;二、 细胞内核酸、蛋白质、 酶、糖与脂类等的显示方法 ;三、特异蛋白抗原的定位与定性;?免疫电镜技术: ?免疫铁蛋白技术 ?免疫酶标技术 ?免疫胶体金技术 应用:通过对分泌蛋白的定位,可以确定某种蛋白的分泌动态;胞内酶的研究;膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等;四、细胞内特异核酸的定位与定性;原位杂交技术;五、放射自显影技术;六.定量细胞化学分析技术;? 流式细胞仪(Flow Cytometry) ?主要应用: 用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量; 测定细胞群体中不同时相细胞的数量; 从细胞群体中分离某些特异染色的细胞; 分离DNA含量不同的中期染色体。 ;流式细胞术;第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术;一、细胞的培养;植物组织培养; 二、细胞工程 ;对细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈 ;显微操作仪;显微操作示意图;单克隆抗体技术

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