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第一节 工具酶的发现和基因工程的诞生 【教学目标】 知识与能力方面： １．简述基础理论研究和技术进步催生了基因工程。 ２．简述基因工程的原理和技术。 过程与方法方面： 1.运用所学的DNA重组技术的知识，模拟制作重组DNA模型 2．运用基因工程的原理，提出解决某一实际问题的方案 情感态度、价值观方面：关注基因工程的发展，体会S、T、S三者之间的关系。 【教学重点】 DNA重组技术所需要3种基本工具的作用。 【教学难点】 基因工程载体需要具备的条件。 【教学方法】 讲授法。 【教学课时】 1课时。 【教学过程】 （导入新课）1973年转基因微生物──转基因大肠杆菌问世；1980年第一个转基因动物──转基因小鼠诞生；1983年第一例转基因植物──转基因烟草出现，实现了一种生物的某些在另一种生物中的表达。科学家的基本意向也和同学们一样。单细胞生物比多细胞生物更容易受到外源DNA的侵入。在长期的进化过程中，使其必须有处理外源DNA的酶。科学家们经过不懈的努力，终于从原核生物中分离纯化出这种酶，叫做限制酶。迄今已从近300种微生物中分离出4000种限制酶。这种酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。酶识别的特定核苷酸序列也不同，这样就为我们切割DNA提供了多种特定的“手术刀”。但它们切割DNA后形成的末端有两种可能一种形成黏性末端，一种形成平末端。限制酶在它识别序列的中心位置两侧将DNA两条单链分割开，就形成黏性末端，而从识别序列的中心位置切开就产生平末端。DNA连接酶是将双链的DNA片段连接起来，就是说DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来。相同之处都是通过形成磷酸二酯键来连接的。? DNA聚合酶 DNA连接酶 化学本质 ?蛋白质 蛋白质? 作用部位 ?磷酸二酯键（单个脱氧核苷酸+片段） ?磷酸二酯键（DNA双链片段+DNA双链片段） 模板 ?需要 ?不需要 （提出问题）如何将重组DNA导入受体细胞中并稳定存在和表达？ 单纯的DNA片段是很难导入受体细胞的，所以我们将切割下来的目的基因导入受体细胞就需要有一个“分子运输车”帮助。不是任何的“分子运输车”都可以用来作目的基因进入受体细胞的载体的。其中的理由要从实际情况出发考虑才能清楚。下面老师提出四个问题供大家思考。 1.假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 2.作为载体没有切割位点将怎样？ 3.目的基因是否进入受体细胞，你如何去察觉？ 4.如果载体对受体细胞有害将怎样？不能分离会怎样？1.导入受体细胞的目的基因不能复制，将在细胞增殖中丢失。 2.载体没有切割位点，外源的目的基因不可能插入。 3.如果载体上有遗传标记基因，这样，在载体进入受体细胞后，就可通过标记基因的表达来检测。 4.载体对受体有害，将影响受体细胞新陈代谢，进而使转入的目的基因也无立足之地。载体不能分离，就不能获得更多带有目的基因的载体。 充当基因进入受体细胞载体的必要条件1. 能自我复制； 2. 有切割位点； 3. 有遗传标记基因； 4. 对受体细胞无害、易分离。 目前通常利用的载体是“质粒”。质粒是能“友好求得真知，自己解答这个问题。 寄宿在细菌细胞内的小型的环状DNA。下面让我们通过插图一起来认识质粒，尤其要在质粒载体结构模式图上找出刚才归纳几个条件的具体体现。 生：找到“复制原点”──说明质粒能复制并能带着插入的目的基因一起复制。 找到“目的基因的插入位点”──说明质粒有切割位点。 找到“氨苄青霉素抗性基因”──说明有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。 找到此质粒来自大肠杆菌──说明没有危害，大肠杆菌是非致病菌，大肠杆菌分裂快，也便于从大量复制个体中分离出来。 下图所示限制酶切割基因分子的过程，从图中可知，该限制酶能识别的碱基序列和切点是( ) A．B．．D． 2．描述基因工程基本步骤的几个步骤 3．举例说出筛选含有目的基因的受体细胞的原理 过程与方法方面： 运用基因工程的技术，提出解决某一实际问题的方案 情感态度、价值观方面： 关注基因工程的发展，体会S、T、S三者之间的关系。 【教学重点】 基因工程的基本操作步骤 【教学难点】 从基因文库中获取目的基因 筛选含有目的基因的受体细胞 【教学方法】 讲授法。 【教学课时】 1课时。 【教学过程】 导入新课）复习：基因工程的操作工具： 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 运载体或载体） 提出问题）﹙先解决为什么要分个步骤的问题，然后解决每一步骤的技术方法问题。 1．为什么要有“目的基因的获取”这一步？引导学生看本专题题图中基因工程的概念：“