pcdna3 1 icp27重组hsv 2dna疫苗的构建及在真核细胞中的表达-construction of recombinant hsv 2 dna vaccine with pc dna 3 1 icp 27 and its expression in eukaryotic cells.docxVIP

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2018-06-01 发布于上海
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pcdna3 1 icp27重组hsv 2dna疫苗的构建及在真核细胞中的表达-construction of recombinant hsv 2 dna vaccine with pc dna 3 1 icp 27 and its expression in eukaryotic cells

ConstructionofpcDNA3.1(+)/ICP27recombinantDNAvaccineagainstHSV-2anditsexpressionineukaryoticcellsABSTRACTObjective:ToconstructanewDNAvaccineagainstHerpesSimplexVirustypeIIandidentifyitsexpressionineukaryoticcellsforthefollowingresearchofimmunogenicityofthevaccine.Methods:CultureandamplificateHSV-2virusinculturedverocell,isolatetotalRNA,amplificateUL54gene(expressingproteinICP27)offull-lengthbyRT-PCR,andthenconnectUL54genetothepMD19-TSimpleVectorandtransformintoE.coliDH5α,extractplasmids.MakeUL54geneandeukaryoticexpressionplasmid—pcDNA3.1(+)containingcohesiveendsbyKpnIandXbaIDoublerestrictionenzymedigestion.Constructrecombinantplasmid—pcDNA3.1(+)/ICP27(viz.HSV-2DNAvaccine),andthenidentificateifsuccessbydoublerestrictionenzymedigestionandsequencing.TransfecttherecombinantplasmidintoCOS-7cellsbymethodofliposome-mediatedtransfection,identificatethetranscriptionofHSV-2DNAvaccineincos-7cellsbyRT-PCRandexpressionbyWesternblotting.Results:WesuccessfullyconstructedpcDNA3.1(+)/ICP27plasmid:a5428bpband(thepCDNA3.1(+)vector)anda1551bp(HSV-2UL54sequence)bandwereshownbydoublerestrictionenzymedigestion;theDNAsequencingofUL54wascompatiblewithUL54sequenceinGenbank.AftertransfectionintoCOS-7cell,alengthof184bpUL54-specificfragmentswassuccessfullydetectedbyRT-PCR,approximately53kDaICP27wasdetectedbyWesternblotting.Conclusion:WesuccessfullyconstructedanewtypeofDNAvaccineagainstherpessimplexvirustypeIIandthenmadeitexpressedineukaryoticcells,soweconstructedasolidfoundationforfurtherstudyofimmunogenicityofthevaccine.Keywords:HerpesSimplexVirustypeII(HSV-2)GenitalHerpes(GH)InfectedCellsProtein27(ICP27)recombinantplasmidDNAvaccine英文缩略词表英文缩写Amp英文全称Ampicillin中文名称氨苄青霉素DMSODimethylsuffixed二甲基亚砜DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸EDTAEthylenedarningtetrameteracid乙二胺四乙酸FBSFetalbovineserum胎牛血清GHGenitalherpes生殖器疱疹HSV-2Herpessimplexvirus2单纯疮疹病毒2型ICP27Infectedcellsprotein27感染细胞蛋白27IPTGIsopropyl-β-d-thiogalactoside异丙基-β-D-硫代半乳糖苷LBLuria-bertanibrothLB培养基PAGEPBSPolyacrylamidegelelectrophoresisPhosphatebuffered