rna干扰her2neu对膀胱癌biu87细胞增殖和凋亡的影响-effect of rna interference with her 2 neu on proliferation and apoptosis of bladder cancer biu 87 cells.docxVIP

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rna干扰her2neu对膀胱癌biu87细胞增殖和凋亡的影响-effect of rna interference with her 2 neu on proliferation and apoptosis of bladder cancer biu 87 cells

目录一、英文缩略语对照表……………………………………………………………1二、论文摘要………………………………………………………………………21、中文摘要…………………………………………………………………22、英文摘要…………………………………………………………………4三、前言……………………………………………………………………………6四、材料与方法……………………………………………………………………91、材料………………………………………………………………………92、方法………………………………………………………………………12五、实验结果………………………………………………………………………221、BIU-87细胞对siRNA有效摄取…………………………………………222、HER2/neusiRNA对BIU-87细胞生长影响………………………………223、HER2/neusiRNA对BIU-8细胞凋亡影响………………………………224、HER2/neumRNA表达水平的影响…………………………………………235、HER2/neu蛋白表达水平的影响…………………………………………25六、讨论……………………………………………………………………………26七、结论………………………………………………………………………………30八、参考文献…………………………………………………………………………31九、致谢………………………………………………………………………………34十、综述………………………………………………………………………………35缩略词表英文缩写英文全称中文FCMFlowcytometriy流式细胞术FBSFetalbovineserum胎牛血清CCK-8assayCellCountingKit-8assyCCK-8法DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜DEPCDiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PCRPolymerasechainreaction聚合酶链反应rpmRevolutionsperminute每分钟转数RTReversetranscription逆转录cDNAcomplementarydeoxyribonucleicacid单链脱氧核糖核酸mRNAMessengerribonucleicacid信使核糖核酸TBETris,boracicacid,EDTAbuffer硼酸EDTA缓冲液EDTAEtaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸siRNASmallinterferingRNA小干扰RNAFAMCarboxyfluorescein羧基荧光素ODOpticaldensity光密度SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠RNAiRNAinterferenceRNA干扰RISCRNA-inducedsilencingcomplexRNA沉默诱导复合物EDTAEthylenediaminetetraceticacid二乙胺四乙酸1RNA干扰HER2/neu对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响摘要目的:实验研究靶向HER2/neu基因的siRNA(smallinterferinRNA)对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响。从而为膀胱癌提供新的治疗方法打下了理论基础。方法:(1)化学合成的靶向HER2/neu基因siRNA在脂质体的介导下转染BIU-87细胞,实验分为HER2/neusiRNA组、空脂质体组、阴性siRNA序列组,以未转染BIU-87细胞为空白对照组;(2)CCK-8法检测沉默HER2/neu基因对膀胱癌细胞生长的影响;(3)利用流式细胞仪检测细胞的凋亡;RT-PCR法检测转染HER2/neusiRNA对膀胱癌BIU-87细胞HER2/neumRNA表达水平的影响Westernblot分析转染HER2/neusiRNA对膀胱癌BIU-87细胞HER2/neu蛋白表达水平的影响结果:(1)转染HER2/neusiRNA后BIU-87细胞的存活率显著下降,从(82.37±0.90)%降低到(56.76±1.70)%,有统计学意义(P0.05);同时能诱导细胞凋亡,siRNA转染组凋亡率达(45.60±0.70)%,与未转染对照组(3.87±0.30)%、空脂质体组(5.50±0.36)%、阴性序列组(5.33±0.51)%比较有统计学意义(P0.05);(2)RT-PCR法检测BIU-87细胞株各组HER2/neu基因的表达情况,发现转染HER2/neusiRNA72h后的BIU-87细胞HER2/neumRNA表达水平(0.26±0.02)下调,与未转染对照组(0.73±0

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