使用针对临床研究的混合模式SPE与亲水作用色谱（HILIC）.PDFVIP

[ 应用纪要 ] 使用针对临床研究的混合模式SPE和亲水作用色谱(HILIC) 对尿液中的儿茶酚胺和变肾上腺素进行快速、同步分析 Jonathan P. Danaceau, Erin E. Chambers 和Kenneth J. Fountain 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 简介 ■ 无需离子对试剂即可实现单胺神经递 临床研究者通常都很关注高浓度尿液中的儿茶酚胺及其O- 甲基化 质与变肾上腺素的保留与基线分离 代谢产物(变肾上腺素)的测定。但是，这些化合物(尤其是去甲肾 上腺素、肾上腺素和多巴胺）由于极性较大，利用反相LC-MS/MS对 ■ 快速、同步定量尿液中的变肾上腺素 其进行分析是一项巨大挑战。因此，许多研究实验室仍采用离子 和儿茶酚胺 对试剂与电化学检测(ECD)分析这类物质。虽然反相LC-MS/MS 已得到 成功应用，但由于尿液基质组分发生离子抑制、保留作用不足和 ■ 可得到线性、准确、精密的结果，线 异丙肾上腺素与肾上腺素未完全分离，致使挑战仍然存在。 性范围为0.5-500 ng/mL 亲水作用色谱(HILIC)已逐渐成为分析极性化合物的首选1-6 。通过对 6 之前发表的方法进行扩展 ，本应用纪要介绍了尿液中单胺神经递 质与儿茶酚胺的提取与分析方法。采用沃特世(Waters®) ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱可实现基于HILIC 的色谱分离。Waters Oasis WCX 96孔板可用来提取尿液中的这些化合物。将复合模式弱阳离子交 换固相萃取(SPE)板，与用于HILIC色谱和Waters Xevo TQD质谱的色谱 沃特世解决方案 柱结合使用，可获得具有出色线性、准确度和精密度的快速、稳 定方法，并且能最大限度减少基质效应。 Oasis® WCX 30 mg 96 孔板 (部件号186002503) 96孔样品收集板，800 µL 圆孔 (部件号186002481) ACQUITY UPLC® BEH Amide 色谱柱， 1.7 m, 2.1 x 100 mm (部件号186004801) ACQUITY UPLC I-Class 系统 Xevo® TQD MassLynx® 软件 关键词 儿茶酚胺，变肾上腺素，HILIC ， SPE ，LC-MS/MS ，样品制备 1 [ 应用纪要 ] 实验 表1.流动相梯度。流动相A和流动相B的组成在方法部分 列出。 LC条件 时间 流速 %A %B LC系统： ACQUITY UPLC I-Class (min) (mL/min) 色谱柱： ACQUITY UP