血管紧张素-1-7对醛固酮激活肾间质成纤维细胞的影响-effects of angiotensin - 1 - 7 on aldosterone-activated renal interstitial fibroblasts.docxVIP

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2018-06-03 发布于上海
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血管紧张素-1-7对醛固酮激活肾间质成纤维细胞的影响-effects of angiotensin - 1 - 7 on aldosterone-activated renal interstitial fibroblasts

血管紧张素-(1-7)对醛固酮激活大鼠肾间质成纤维细胞的影响摘要目的：观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对醛固酮(ALD)激活大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）及细胞外基质分泌的影响，并初步探讨其机制。方法：体外传代培养NRK-49F细胞，按1×105/ml浓度接种于六孔板中，按以下实验分组加入不同干预因素:（1）对照组：仅加入含体积分数10%胎牛血清的DMEM-F12培养基，即正常培养基；（2）ALD组：正常细胞培养基中加入的ALD刺激液，调整其终浓度为10-7mol/L；（3）Ang-(1-7)组：正常细胞培养基中加入的Ang-(1-7)刺激液，调整其终浓度为10-6mol/L；（4）ALD+Ang-(1-7)组：正常细胞培养基中加入Ang-(1-7)+ALD混合刺激液，调整其终浓度分别为10-6mol/L和10-7mol/L。按上述实验分组进行如下检测：（1）干预细胞48h后，运用细胞免疫化学染色法检测细胞激活标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达；（2）干预细胞48h后，运用酶联免疫吸附方法（ELISA）检测各组细胞上清液中Ⅰ型胶原（ColⅠ）的含量；按上述实验分组干预细胞30min后，提取细胞总蛋白，运用蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测各组细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶（pERK1/2）的表达。结果：（1）细胞免疫化学染色检测结果：干预48h后:对照组组细胞仍呈长梭型，胞浆内仅见少量棕黄色颗粒，Ang-(1-7)组与之类似；而ALD组细胞胞浆比例增大，细胞肥大，部分细胞呈多角状，胞浆内染色明显，呈颗粒状，分界清楚。半定量分析显示对照组细胞及Ang-(1-7)组细胞只有基础量的α-SMA表达，与对照组细胞相比较，Ang-(1-7)组细胞α-SMA的表达差异无统计学意义（P0.05），而ALD组细胞及ALD+Ang-(1-7)组细胞α-SMA的表达显著升高（P0.05）；与ALD组细胞相比较，ALD+Ang-(1-7)组细胞α-SMA的表达明显减少（P0.05）。（2）ELISA检测结果：干预48h后：ALD组细胞及ALD+Ang-(1-7)组细胞上清液中ColⅠ含量较对照组显著升高（P0.05），而Ang-(1-7)组细胞上清液中ColⅠ含量与对照组相比较没有明显变化（P0.05）；与ALD组细胞相比较，ALD+Ang-(1-7)组细胞上清液中ColⅠ含量明显减少（P0.05）。（3）Westernblot检测结果：干预细胞30min后：与对照组细胞相比较，ALD组细胞pERK1/2的表达显著升高（P0.05），Ang-(1-7)组细胞pERK1/2表达差异无统计学意义（P0.05）；与ALD组细胞相比较，ALD+Ang-(1-7)组细胞pERK1/2表达明显减少（P0.05）。结论：（1）Ang-(1-7)能抑制ALD激活NRK-49F细胞；（2）Ang-(1-7)抑制ALD激活NRK-49F细胞的机制之一是抑制ERK1/2信号通路磷酸化。关键词：血管紧张素-(1-7)；醛固酮；肾间质成纤维细胞；α-平滑肌肌动蛋白；细胞外信号调节激酶Influenceofangiotensin-(1-7)onaldosteroneinducedrat’srenalinterstitialfibroblastactivationAbstract:bjective:Toobservetheinfluenceandexplorethemechanismofangiotensin-(1-7)[Ang-(1-7)]onaldosterone(ALD)inducedrat’srenalinterstitialfibroblast(NRK-49F)activationandthesecretionofextracellularcellmatrix.Methods:TheNRK-49FweremaintainedinDMEM-F12mediumsupplementedwith10%FBS.Experimentshadbeenperformedafterthecellswereprepared1×105/mlsuspensionwithDMEM-F12andseededinsix-wellplates.Thecellsweredividedintofourgroupsaccordingtothedifferentinterventionfactors:(1)controlgroup:theNRK-49FweremaintainedinDMEM-F12mediumsupplementedwith10%FBS;(2)ALDgroup:thecellsmaintainedinDMEM-F12mediumsupplement