液态氟碳纳米脂质微粒靶向识别存活心肌实验分析-experimental analysis of targeting identification of viable myocardium by liquid fluorocarbon nano-lipid particles.docxVIP

中文摘要本研究旨在制备一种以脂质成分为外膜，液态氟碳（PFOB）为核心的纳米微粒 超声造影剂，检测其粒径、表面电位、稳定性等理化性质及显影效果，并将其与包裹 氟碳气体（C3F8）的脂质微泡造影剂进行比较，探讨两者之中哪种更符合超声靶向造 影的要求；尝试通过单克隆抗体－生物素－亲和素－生物素桥连，使自制的液态氟碳 纳米脂质微粒靶向结合至存活心肌上，特异性增强存活心肌的超声信号，从而实现超 声靶向造影对存活心肌的识别。本研究包括以下两个部分：第一部分：PFOB 纳米脂质微粒与 C3F8 纳米脂质微泡一般性质及显影效果比较：体外研究目的 制备 PFOB 纳米脂质微粒与 C3F8 纳米脂质微泡，比较两者一般理化性质,体外 显影效果及耐声压性。方法 分别制备 PFOB 纳米脂质微粒与 C3F8 纳米脂质微泡，检 测两种造影剂形态、粒径、表面电位、浓度以及稳定性，并进行比较。制备生物素化（外膜标记生物素）及空白（外膜未标记生物素）的 PFOB 脂质微粒及 C3F8 微泡造影 剂。以高频探头分别在基波及 CPS 两种成像模式下观察各组造影剂加入亲和素前、后 的显影效果，并运用 METLAB 软件分析比较。调节探头输出功率，使 MI 为 0.28 与 0.56 两个水平上对 PFOB 脂质微粒及 C3F8 脂质微泡进行超声辐照，分别于辐照 10s，20s， 30s 后，观察显影情况有无变化，并运用 METLAB 软件分析比较。结果 ①PFOB 脂 质微粒与 C3F8 脂质微泡粒径分别为（152.30 ± 35.99）nm，（774.59 ± 108.59）nm， 前者明显小于后者（P 0.05）；表面电位分别为（-40.90±6.51）mV，（-14.80±3.97） mV，前者明显大于后者（P 0.05）。②PFOB 脂质微粒造影剂的浓度及粒径，在整 个观察期间内无明显改变。C3F8 脂质微泡造影剂制备后放置 12h 以内，浓度尚未发生 明显改变，而放置 24h，2d，4d 及 1w 后浓度较 0h 明显减低（P0.05）；C3F8 微泡造 影剂放置 2d 内粒径尚未见明显变化，放置 4d 及 1w 后粒径较 0h 明显增大（P0.05）。③显微镜下观察，空白 PFOB 脂质微粒及 C3F8 脂质微泡加入亲和素前、后微粒分散度 均较好，未见明显变化；生物素化 PFOB 脂质微粒及 C3F8 脂质微泡加入亲和素前分散 度良好，而加入亲和素后均发生聚集现象。空白 PFOB 脂质微粒及 C3F8 脂质微泡加入 亲和素前、后粒径均无明显变化，生物素化 PFOB 脂质微粒及 C3F8 脂质微泡加入亲和素后粒径均较加入前明显增大（P0.05）。④基波成像模式下体外显影结果显示，加入亲和素前，空白及生物素化 PFOB 脂质微粒则均未见明显显影，而空白及生物素化 C3F8 脂质微泡均有较好的显影效果；加入亲和素之后，生物素化 PFOB 脂质微粒造影 剂显影明显增强（P0.05），而空白 PFOB 脂质微粒及两组脂质 C3F8 微泡显影情况无 明显改变。⑤CPS 成像模式下体外显影结果显示，生物素化 PFOB 脂质微粒造影剂加 入亲和素之前及之后均未见明显信号显示，两者间无明显差异；而生物素化 C3F8 脂质 微泡造影剂加入亲和素之前及之后均可见良好的显影效果，两者的显影强度亦无明显 差异。⑥耐声压性测定结果显示，PFOB 脂质微粒造影剂在低声压（MI=0.28）及高声 压（MI=0.56）环境下，随辐照时间延长，显影强度均未见明显改变。C3F8 脂质微泡 造影剂在低声压（MI 0.28）环境下，辐照 10s 后显影强度尚未见明显改变，辐照 20s 后显影强度明显减低（P0.05），辐照 30s 后显影强度进一步减低（P0.05）；而在 高声压（MI 0.56）环境下，辐照 10s 后显影强度即明显减低（P0.05），辐照 20s， 30s 后显影强度进一步减低（P0.05）。结论与 C3F8 脂质微泡造影剂相比，以 PFOB 为核心的纳米脂质微粒造影剂无论是穿透性，稳定性，耐声压性能还是靶向显影“信 噪比”上均更胜一筹，更符合靶向超声造影剂的要求，具有更为广阔的临床应用前景。 第二部分：PFOB 纳米脂质微粒对大鼠缺血－再灌注模型中存活心肌靶向 显影研究目的 制备一种靶向识别存活心肌的 PFOB 纳米脂质微粒造影剂，观察其体内靶向显 影效果。方法 制备表面标记有生物素及荧光的 PFOB 纳米脂质微粒造影剂，检测其 粒径、表面电位、浓度等理化性质。将生物素标记的 MCP-1 抗体、罗丹明标记的亲 和素、生物素及荧光标记的脂质微粒造影剂依次注入大鼠缺血－再灌注模型体内，观 察其靶向显影效果。12 小时后取心脏标本进