一例wiskott-aldrich综合征回复突变患儿免疫功能和临床症状分析-analysis of immune function and clinical symptoms of a case of wiskott - aldrich syndrome with reversion mutation.docxVIP

重庆医 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 bp 英文全称 Base pair 中文全称 碱基对 cDNA Complementary deoxyribonucleic acid 互补脱氧核糖核酸 ddH2O DNA Double distilled water Deoxyribonucleic acid 双蒸馏水 脱氧核糖核酸 FCM Flow cytometric analysis 流式细胞术 h Hour 小时 HSCT Hematopoietic stem cell transplantation 造血干细胞移植术 IgA Immunoglobulin A 免疫球蛋白 A IgE Immunoglobulin E 免疫球蛋白 E IgG Immunoglobulin G 免疫球蛋白 G IgM Immunoglobulin M 免疫球蛋白 M IVIg Intravenous Immunoglobulins 静脉注射丙种球蛋白 LB Luria-Bertani culture LB 培养基 min Minute 分钟 ml Milliliter 毫升 mm Millimeter 毫米 mRNA Messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 MPV Mean Platelet Volume 平均血小板体积 PBMCs Peripheral blood mononuclear cells 外周血单个核细胞 PIDs Primary immunodeficiency diseases 原发性免疫缺陷病 PBS Phosphate buffer solution 磷酸缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 RNA Ribonucleic acid 核糖核酸 rpm Round per minute 每分钟转数 1 s Second 秒 μl Microlitre 微升 WAS Wiskott-Aldrich syndrome Wiskott-Aldrich 综合征 WASp Wiskott-Aldrich syndrome protein Wiskott-Aldrich 综合征蛋白 2 一例 Wiskott-Aldrich 综合征回复突变患儿免疫功能和 临床症状分析 摘 要 目的：分析一例 Wiskott-Aldrich 综合征回复突变患儿基因型、 WASp 细胞表达谱系及其与免疫功能和临床表现之间的可能关系。 方法：患儿男，现 13 岁，出生时发现湿疹、血小板减少及反复感 染。5 岁时外院诊断为 Wiskott-Aldrich 综合征。2009 年因血小板减少 伴全身反复出血第一次就诊于我院。2010 年第二次来我院检查，经 WASp 流式细胞术分析、WASp 基因分析及 T-A 克隆后序列分析证实 为 WASp 基因回复突变患儿。对患儿不同年龄时采集的标本，采用磁 珠或流式细胞术分选骨髓及外周血各种细胞亚群，采用流式细胞术检 测 WASp，进行 WAS 基因分析；采用 Spetratyping 法分析 T 细胞抗原 受体多样性，采用细胞内细胞因子染色分析 T 细胞免疫功能。 结果：经颊粘膜刮片采集细胞进行 DNA 序列分析证实该患儿生殖 细胞水平突变为 WASp 基因无义突变（155CT）。患儿幼年时为典型 WAS 患儿，家系中有因 WAS 早年病死成员。患儿至 10 岁时，临床症 状明显好转，外周血细胞部分表达 WASp，经过基因序列分析及 PCR 产物 TA 克隆后基因分析，证实该患儿发生回复突变。此后分别于 2011 年和 2012 年分析外周血各群细胞表达 WASp 水平，发现 2011 年 CD3+CD4-CD8+T 细胞部分表达 WASp（74.44%），CD3+CD4+CD8-T 3 细胞 WASp 表达阴性，CD19+B 细胞 WASp 表达阴性，CD56+NK 细 胞部分表达 WASp（93.71%）。CD4+T 细胞产生细胞因子能力与正常 对照无差别。骨髓中 CD34+细胞 WASp 表达阴性，CD34-细胞部分表 达 WASp，CD42b+巨核细胞部分表达 WASp（42.31%）。2012 年（患 儿 12 岁时）外周血中 CD3+CD4-CD8+T 细胞部分表达 WASp（39.16%）， CD3+CD4+CD8-T 细胞部分表达 WASp（15.3%），CD56+NK 细胞部 分表达 WAS 47.65%），而 CD19+ B 细胞仍不表达 WASp。三次 TCRVβ 多样性检测结果无明显差别。 结论：（1）WAS 基因回复突变可使部分细胞表达 WASp 蛋白，感 染、湿疹等临