三三酶化学修饰.pptxVIP

二、酶化学修饰的目的 1. 研究酶的结构与功能的关系。（50年代末） 2. 人为改变天然酶的某些性质，扩大酶的应用 范围。（70年代末之后） 1）增强酶天然构象的稳定性与耐热性 2）保护酶活性部位与抗抑制剂 3）维持酶功能结构的完整性与抗蛋白水解酶 4）消除酶的抗原性及稳定酶的微环境 ; 1）、如何增强酶天然构象的稳定性与耐热性 修饰剂分子存在多个反应基团，可与酶形成多点交联。使酶的天然构象产生“刚性”结构。 2）、如何保护酶活性部位与抗抑制剂 大分子修饰剂与酶结合后，产生的空间障碍或静电斥力阻挡抑制剂，“遮盖”了酶的活性部位。;3）、如何维持酶功能结构的完整性与抗蛋白水解酶 酶化学修饰后通过两种途径抗蛋白水解酶： A. 大分子修饰剂产生空间障碍阻挡蛋白水解酶接近酶分子。“遮盖”酶分子上敏感键免遭破坏。 B. 酶分子上许多敏感基团交联上修饰剂后，减少了受蛋白水解酶破坏的可能性。;4）、如何消除酶的抗原性及稳定酶的微环境 A. 酶蛋白氨基酸组成的抗原决定簇，与修饰剂形成了共价键。 破坏了抗原决定簇——抗原性降低乃至消除 “遮盖”了抗原决定簇——阻碍抗原、抗体结合 B. 大分子修饰剂本身是多聚电荷体，能在酶分子表面形成“缓冲外壳”，抵御外界环境的极性变化，维持酶活性部位微环境相对稳定。;三、原理;四、修饰的一般程序;五、化学修饰方法;极性氨基酸;1）、-NH2的化学修饰(主要用于赖氨酸的修饰）;2）、-COOH的化学修饰（主要用于谷氨酸和天冬氨酸）;3）、-SH的化学修饰（半光氨酸）;4）、咪唑基的修饰（ 组氨酸）;5）、胍基的修饰（精氨酸）;6）、吲哚基的化学修饰（色氨酸）;7）、（酚）羟基残基的修饰（酪氨酸，丝氨酸, 苏氨酸）;8）、脂肪族氨基酸残基的修饰;8）、甲硫基的修饰（甲硫氨酸）;9）、二硫键的修饰;2、酶分子表面的化学修饰;１）ＰＥＧ的修饰（常采用单甲氧基MPEG的衍生物）;２）、右旋糖酐（可作代血浆用）及右旋糖酐硫酸酯的修饰;３）、糖肽（水解纤维蛋白或γ-球蛋白而获得）;４）、其他大分子（肝素、血清白蛋白）;白蛋白;3、亲和标记;4、肽链的有限水解;5、氨基酸置换修饰;6、金属离子置换修饰;六、酶经修饰后的性质变化;1、酶稳定性;2、抗原性;3、对各类失活因子的抵抗力;4、半衰期及酶活残留率;5、pH;6、Km;七、酶化学修饰的应用;2）、专一性化学修饰;;活性中心基团的鉴定标准;2、医药（大分子对酶分子表面的化学修饰）;