二十经典液相色谱法.pptx

经典液相色谱法;经典色谱法优点：;内容简介;第一节 吸附柱色谱法;（一）吸附与吸附平衡;(二) 吸附等温线 (absorption isotherm) ;吸咐等温线有三种类型：线型、凸型和凹型。;三种等温线的讨论;进样量对保留值的影响; 二、吸附剂;1. 硅 胶 ;硅胶：中等极性吸附剂 吸附机制： 表面的硅醇基，与物质形成氢键;硅醇基的两种形式:;2.氧化铝：强极性吸附剂;;(二)吸附剂的活性;3.聚酰胺;三、色谱条件的选择;常用溶剂的极性顺序为： ;吸附剂和流动相的选择;2、吸附剂的选择及用量 酸性成分：硅胶 碱性成分：氧化铝 黄酮类：聚酰胺;;2.可用点滴实验法选择展开剂;四、操作方法 1、色谱柱的制备 要求：填装均匀、紧密，不能有气泡。 装柱时柱要垂直，表面平整。 固定相的用量适宜。 柱体：色谱柱、注射器、滴定管 方法：干装法、湿装法;四、操作方法 ;;(2)尼龙柱 ;柱色谱的制备流程 (四步曲）;2. 加样与洗脱 ;(二)薄层色谱 (thin layer chromatography) ;特点：;薄层色谱法的应用广泛;按分离机理：吸附、分配、离子交换等。 吸附薄层色谱法 原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。 组分因吸附系数不等实现分离。 （吸附薄层应用最为广泛，重点讨论！！！） 　　;薄层色谱法的主要类型和原理;薄层色谱操作方法（四步曲）;1. 制 板;硅胶的活度：与含水量的关系：含水量高，活性 级高，活度低。 活化：加热至100℃左右，除去吸附水提高活度。30min左右 （注意温度不可过高） 分离效率：与其粒度、孔径及表面积等有关。 常用硅胶： ——硅胶H，不含黏合剂 ——硅胶G，含煅石膏黏合剂 ——硅胶GF254，含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激活的硅酸锌，在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。 ; 仪器装置： （2）预制板 由工厂生产出来的商品板，使用方便，涂布均匀，薄层光滑，牢固结实，分离效果及重现性好。 ;2．点样——成功分离和精确定量的关键;点样装置： 1.定量毛细管 2.手动点样器 3.薄层自动点样仪 ;3．展开 ——条件选择决定分离结果;展开过程：;边缘效应 ： 点于同一薄层的同一物质的斑点，在色谱展开过程中，靠薄层边缘处斑点的Rf值与中心区域斑点的Rf值有所不同，多数呈凹形。 ;减少边缘效应的办法：;4．斑点的检出 ;五、定性与定量分析;;薄层色谱法参数;定性参数 1;定性参数2;相平衡参数;相平衡参数与Rf值关系;薄层色谱法定量分析 ;薄层扫描法 （TLC-SCAN）;TLC-SCAN 试验条件的选择;（3）吸收测定法原理： 光学系统： 光源(氘灯与钨灯)、单色器(入口狭缝．出口狭缝、光栅等)．以及检测器(监测光电倍增管、反射和透射测定光电倍增管)组成。 吸收测定类型：有反射法和透射法两种。 反射法：将光束照射到薄层斑点上，测量反射光的强度；反射光灵敏度较低，受薄层厚度影响较小，基线较稳，信噪比较大，因而使用较多。 ;反射法示意图：;透射法：受薄层厚度影响较大，且玻璃对紫外光有吸收，所以实际应用较少。; 薄层扫描仪光学系统结构示意图;基本原理与方法; ; （2）薄层色谱斑点的反射率(R);(3)薄层色谱斑点的吸光度(A) ;i及i0分别为透过斑点及空白板的透射光光强； I0为照射光光强； T与T0分别为斑点及空白板的透射率； ;反射法示意图; ;（2）反射法的Kubelka—Munk曲线;透射法和反射法的Kubelka—Munk曲线比较：; ; 用曲线校正法校直Kubelka—Munk曲线，必须巳知薄层板的SX值，Merck预制氧化铝板的SX＝7，可参考上述数据试调，而后检查校正是否适宜，修正SX值再校，直至A—KX曲线成直线为止。检查方法如下图所示。;扫描条件：扫描方式、波长及测光方式等。 扫描方式：直线式及锯齿式扫描。 扫描波长的选择：至关重要，不仅关系检测灵敏度，而且关系干扰的排除等。 测光方式：透射式及反射式 2.1 扫描方式选择 (1) 直线扫描 直线式扫描是用一光带先照射在薄层板的一端，而后作直线运动至另—端。