八肋游仆虫中心蛋白片段分子与金属离子感化的光谱研究.pdfVIP

摘要 摘 要 kDa的酸性钙结合蛋白，属于钙调蛋 中心蛋白(centrins)是一种约20 白大家族。中心蛋白广泛存在于真核生物中，如藻类、酵母、原生动物、 高等植物、哺乳动物等。中心蛋白在中心粒的复制和中心基体纤维的收 缩中起重要的作用，与细胞中纤维的收缩、细胞的分裂等密切相关。到 目前为止，关于中心蛋白的研究主要集中在其生物功能和结构上。 近年来，稀土资源的不断开发和利用增加了稀土元素进入生命体的途 径和机会，这使得稀土元素长期使用的安全性和对生物功能的影响受到 人们的普遍重视。钙离子与稀土离子具有相近的配位环境和配位结构， 因此，稀土元素进入食物链必将影响钙离子作用的发挥。中心蛋白含有 四个EF—hand结构域，每个结构域均可结合一个钙离子，所以它可能是 稀土离子在生物体内实现其生物效应的载体。 原生动物八肋游仆虫(Euplotes 地位的单细胞真核生物，对该生物的中心蛋白的研究，有助于阐明低等 真核生物的细胞分裂、细胞运动等重要生命活动过程的本质。本文应用 分子生物学的方法表达、纯化得到了纯度较高(90％以上)的中心蛋白分子 个EF手结构域)。并运用GenePro给出了它们的一些参数，诸如分子量、 等电点、净电荷量、摩尔消光系数等。以期对后续研究起到理论性指导 作用。 应用铽敏化荧光法我们得到了Tb3+与P12的条件结合常数，而后应用 铽的条件结合常数和离子竞争法，分别求得了Ca2+和M92+与P．：的相对 结合常数。并得到了铽与P。：的反应热力学数据，反应的彳。G0，说明 的结合作用力主要为静电作用力。 最后以TNS作为疏水荧光探针，研究了Pl：、P：，结合几种金属后构 象变化的情况。结果表明，金属的离子势越大，对蛋白的构象变化影响 八肋游仆虫中心蛋白片段分子与金属离子作用的光谱研究 也越大。并计算得到了几种金属结合形式下与TNS的条件结合常数。共 振光散射研究表明，P12由于含有全分子的氨基端，故而更容易聚合，推 测P。：在蛋白的聚合过程中起重要作用。 关键词：中心蛋白片段分子；荧光；TNS；金属离子 ABSTRACT ABSTRACT areanacidic of20 tothe Centrins protein kDa，whichbelongs highly conservedEF—handCaM of isa superfamilyCa”．bindingproteins．It conserved indiverse evolutionary highly protein lineages， ubiquitous andmammaliancells．Centrins includingalgal，higherplants，invertebrate afundamentalroleincentriole andcontractionofcenter play duplication basal to studiesonthecentrinshavestillbeen now,the bodyfibrous．Up onthestructureandfunction． concentrated Inrecent the ofrareearth earth