金属离子及其配合物与生物大分子相互作用的研究及分析运用.pdfVIP

山东人掌硕卜学位论史 摘 要 机体是由数以亿力．计分子量大小不等的分子组成。蛋白质和核酸是体内主要 的生物大分子。核酸是遗传信息的载体，是生物物种延续、物种进化的决定因素； 蛋白质担负着各种生理功能，是生物性状的直接表达者。它在人体代谢中扮演极 为重要的角色，从整体上维持生物体新陈代谢活动的进行，人类绝大多数疾病都 是由蛋白质异常引起的．因此核酸与蛋白质的定量分析在生命科学，生化药物， 食品分析及临床检验中都有着重要作用。深入研究小分子物质与核酸和蛋白的作 用，建立核酸，蛋白快速简便的分析方法，对分子水平上阐明生命的奥秘、开发 新型药物、攻克许多疑难病症以及促进信息科学的发展都具有重要的意义，是当 前生物分柝化学研究的前沿和热点。 本文致力于寻找新的核酸和蛋白质探针，以建立灵敏的定量检铡的方法，以 荧光和共振光散射技术为主要研究手段．同时应用吸收光谱技术，表面张力测定 技术，电势电泳技术，透射电子显微技术等手段进行了机理研究和讨论。本文共 五部分。第一部分综述了核酸和蛋白质发光探针的基本原理、研究进展、发展趋 势。 在论文的第二部分，我们以Eu3+．BA的配合物为探针建立了灵敏的核酸分析 方法．研究表明。在CTMAB存在下。核酸的加入能显著增强Eu．BA配合物中 E矿+的荧光。且荧光增强程度与核酸的浓度在一定范围内成正比．在最佳实验条 ng／mL．该方法用于实际样品拟南芥中DNA含量的测定，结果令人满意．机理 研究表明，CTMAB与DNA所形成的离子聚合物为E矿+．BA配合物提供了疏水 的微环境，从而使其荧光增强。另外，我们推测形成Eu3+-BA配合物之后多余 的队分子可以通过疏水作用进入到CTMAB与DNA所形成的离子缔合物中， 并通过分子问作用力将能量转移给Eu3+离子．所以我们认为，体系的荧光增强源 于疏水微环境的形成和分子间能量转移． 论文的第三部分中，1矿．BA配合物被用作蛋白质的荧光探针，研究了蛋白 质与配合物间的作用机理．实验表明，在SDBS存在下，蛋白质的加入能显著增 山东人学碗卜学位论_盘= g／mL和 白质的测定。BSA、EA和HSA的检出限分别为3．9)c10’9g／mL、4．0×10。9 8．5×Io-9 减少配合物与水分子之间的碰撞而导致的能量损失，因而有利于体系荧光的增 强。另外，过量的BA也可能通过分子问能量转移将能量传递给Tb3+离子，从而 迸一步增强体系的荧光． 在论文的第四部分，我们报道了一个用金属配合物作共振光散射探针测定蛋 液中。BSA和SLS可以增强Y■T1A体系的共振光散射强度。体系共振光散射 强度增强的程度在一定范围内与蛋白质的浓度成正比，可用于蛋白质的测定． BSA、HSA和EA的检出限分别为5．4、5．0和6．7 ng／mL．该方法己用于实际样 品的测定，并取得了满意的结果。研究认为，带正电荷的Y30r1A的配合物能 与带负电的BSA和SLS形成一个大的离子缔合物从而导致共振光散射强度的增 强。 在论文的第五部分，研究了Al弘和BSA的楣互作用。在pH为5．75的HMTA 缓冲溶液中，Al”和BSA的溶液混合后形成了大的聚集体，从而导致较强的光 散射强度，且光散射的强度与蛋白质的浓度在一定范围内成正比，该法可用于蛋 1．0X107．1．0X10。59／mE和1．0X10’7．I．0X10巧g／mL。 本论文的主要特点是： 在已报道的核酸及蛋白质的测定体系中，其探针大多为染料．本论文主要以 金属离子及配合物作为发光探针来测定生物大分子． I．以三种稀土一§一双酮配合物为探针，分别利用荧光和共振光的方法定量测 定核酸和蛋白质，实验证明这些方法简便、快速，且有较高的灵敏度。 2．建立了以金属离子Al弘为探针定量测定蛋白质的简便的光散射方法，该方 法的建立还为直接研究某些无机离子与生物大分子的相互作用提供有益的借鉴。 3．本文以分析化学，分子生物学为研究背景，利用荧光技术、光散射技术、 吸收光谱技术、电视显微电泳技术以及透射电子显微技术等手段研究了体系作用 的机理． 山东人学帧f‘学位论文 上述研究为蛋白