gdf9 dnmt1 zar1 mater基因在绵羊卵母细胞 卵丘细胞和胚胎中的表达分析-expression and analysis of gd f9 dnm t1 za r1 mate gene in sheep oocyte cumulus cells and embryos.docx

Gdf9、Dnmt1、Zar1、Mater 基因在绵羊卵母细胞、卵丘细胞和胚胎中的表达分析摘要卵母细胞成熟与质量直接影响着卵母细胞受精及胚胎发育，且卵丘细胞和卵母细胞之间存在着相互作用。本研究运用Real-time PCR技术，以不同时期、不同培养方式的绵羊卵母细胞、卵丘细胞、胚胎为研究对象，检测Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1mRNA 在各细胞组中的表达水平。探讨卵母细胞和早期胚胎发育过程中基因的表达模式，卵丘细胞与卵母细胞互相作用的分子机理以及Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1mRNA水平变化与卵母细胞质量的相关性。主要研究结果如下：Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1mRNA 表达水平随着卵母细胞成熟和胚胎分裂逐渐降低(P0.05)；Gdf9和Zar1mRNA从卵母细胞至囊胚都有表达，Dnmt1mRNA在16-细胞期表达水平降到最低(P0.05)，在囊胚中没有检测到，MatermRNA则在8-细胞期降到最低(P0.05)；在GV期卵母细胞中Gdf9、Zar1、MatermRNA相对表达水平最高(P0.05)；Dnmt1mRNA却是在12h 表达水平达到最高(P0.05)；随着卵母细胞的成熟，各基因都在18-24 h逐渐降低且差异显著(P0.05)；然而在30h，4 个基因的表达水平又显著上升(P0.05)。4 种基因的mRNA 在无极体卵母细胞中的表达水平均高于在有极体卵中的表达水平(P0.05)。检测Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1mRNA在不同培养方式卵母细胞和卵丘细胞中的表达水平，结果显示：Gdf9、Zar1、MatermRNA在体外培养的裸卵中的表达水平均低于卵丘-卵母细胞复合体(P0.05)；Gdf9、Zar1、MatermRNA在未成熟卵母细胞中的表达高于24h 成熟卵母细胞(P0.05)，而在未成熟卵丘细胞中的表达低于成熟培养的卵丘细胞(P0.05)。综上所述，Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1mRNA在早期胚胎中表达呈动态变化；Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1mRNA表达水平在24h成熟质量差的卵母细胞中的表达水平高于24 h 成熟质量好的卵母细胞，可以作为衡量卵母细胞质量的分子指标；Gdf9、Zar1、MatermRNA表达有差异，提示上述这些基因可能参与了卵丘细胞和卵母细胞之间的互相作用。关键词：卵母细胞成熟；早期胚胎发育；卵丘细胞；卵母细胞质量；实时定量PCRGdf9、Dnmt1、Zar1、MaterExpressioninOoctyes、CumulusCellsandEmbryosofSheepAbstractOocytematurationandqualityinfluencefertilizationandembryodevelopmentdirectly, andtherearesomeinteractionsbetweenoocytesandcumuluscells.ThisthesisstudiedthemRNAexpressionofGdf9、Zar1、Mater、Dnmt1,analyzingbyusingReal-timePCR,inovineoocytes,cumuluscellsandembryosfromdifferentsources,stagesorculturingsystemsin ordertoinvestigatetheexpressionpatternsofthosefourgenesduringovineoocyte maturationandpreimplantationembryonicdevelopment,andtherelationshipbetweenoocyte qualityandmRNAlevelsofGdf9,Zar1,Mater,Dnmt1.ThemRNAlevelsofGdf9,Zar1, Mater, Dnmt1decreasedgraduallyduringdevelopmentofoocytesandembryos(P0.05).The mRNA ofGdf9 andZar1weredetectedfromoocytetoblastula.ThemRNAlevelsofDnmt1 waslowestin16-cellstageandnotdetectedinembryos(P0.05).ThemRNAlevelsofMater waslowestin8-cellstage(P0.05)andthemRNAlevelsofGdf9,Zar1, Materwerehighest inGVoocytes(P0.05).ThemRNAlevelsofDnmt1werehighestin