gdf15促进乳腺癌细胞增殖和侵袭机制的分析-analysis on the mechanism of gd f15 promoting breast cancer cell proliferation and invasion.docx

优秀毕业论文精品参考文献资料中文摘要第一部分：前 期 研 究 表 明 IMP1(insulin-like growth factor II mRNA binding protein 1)可以与β-actin mRNA 形成 IMP1-mRNP 复合物，从而调控β-actin mRNA 的运输和降解。宋婷婷、郑意等人随后发现 mRNA 结合蛋白 IMP1 的 RRM12(RNA recognition motif)区域与微管驱动蛋白 KIF11(Kinesin family member 11)的尾部有 较强的相互作用。为了研究 IMP1-RRM12 和 KIF11-tail 对β-actin mRNA 定位的 影响，我们构建了 IMP1 截断蛋白质粒 pUBC–cherry 质粒表达 IMP1-RRM12， IMP1-KH12(hnRNP K-homology 12)，IMP1-KH34-cherry 融合蛋白。并用 Western blot 鉴定。同时构建了 pUBC-KIF5A-tail–cherry 作为对照。 第二部分：前期研究表明 IMP1 抑制 MDA231 乳腺肿瘤细胞的侵袭。黄振强 等人将 MDA231/GFP 和 MDA231/IMP1-GFP 细胞注射到 SCID(severe combined immune deficiency)小鼠乳腺脂肪垫处， 8 周后观察小鼠肿瘤生长情况和肺转移 情况，结果发现 IMP1 可以抑制乳腺肿瘤生长和肺转移。因为 IMP1 是一种 mRNA 结合蛋白，所以我们猜测 IMP1 可能通过调节某些 mRNA 的表达抑制乳腺肿瘤 的生长和转移。为了证实这个猜想，我们对对照组与 IMP1 组小鼠肿瘤组织的总 RNA 进行了基因芯片分析，随后从 IMP1 组中选取了上调或下调 2 倍以上且与 肿瘤生长转移相关的基因，并在细胞和小鼠肿瘤水平上用实时定量 PCR 验证了 基因芯片中上调、下调的基因的表达，结果显示大部分基因的表达与基因芯片一 致。那么 IMP1 与所选相关基因是否有直接的相互作用呢？我们又在细胞和小鼠 肿瘤水平上，通过 RNA 免疫共沉淀法对其进行了进一步研究，结果显示，在这 两 种 水 平 上 ， GDF15(growth differentitation factor 15) 、 PTGS2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2) 、 CEBPB(CCAAT/enhancer binding protein beta)基因的 mRNA 与 IMP1 有直接相互作用。第三部分：qRT-PCR 和 RNA 免疫共沉淀结果结果显示，IMP1 即可以下调 GDF15 mRNA 的表达，又与 GDF15 mRNA 有相互结合作用。GDF15 属于 TGF-β 超家族成员。在正常组织中 GDF15 几乎不表达，但在受伤组织以及胃肠道癌、 前列腺癌、宫颈癌和乳腺癌等多种癌组织中 GDF15 均显示高表达。研究表明，I在胃癌、前列腺癌细胞中 GDF15 过表达可以促进细胞的增殖和侵袭。所以我们 猜想 GDF15 可以促进 MDA231 乳腺癌细胞的增殖和侵袭，而 IMP1 可能通过下 调 GDF15 mRNA 的表达来抑制乳腺癌的侵袭。本实验中，我们构建了稳定过表 达 GDF15 的 MDA231 人乳腺癌细胞系，并用 MTT 法和 transwell 法测定了 GDF15 对细胞增殖和侵袭的影响，结果表明，GDF15 对 MDA231 人乳腺癌细胞的增殖 和侵袭有一定的促进作用。大量研究表明，GDF15 在多种肿瘤细胞中可以激活 Akt 和 ERK1/2 通路。我们假设 GDF15 在 MDA231 乳腺癌细胞中也可以激活 Akt 和 ERK1/2 通路，Western blot 结果显示 GDF15 过表达可以增加 ERK1/2 的磷酸 化。【关键词】质粒构建，实时定量 PCR，RNA 免疫共沉淀，生长分化因子 15， 细胞增殖与侵袭II PAGE PAGE IIIAbstractPart one ： Previous studies have shown that IMP1 interacted with β-actin and regulated β-actin mRNA transport and degradation. Subsequently, Song Tingting ，Zheng Yi et al found the strong interaction between RRM12 region of IMP1 protein and the tail region of KIF11 protein. In order t