孕马尿雌酮硫酸钠单抗研制及其检测试纸条制备方法分析-preparation of pregnant equine estrone sodium sulfate monoclonal antibody and analysis of preparation method of test strip.docxVIP

英文缩略词对照表英文缩写英文全名中文译名Aaminopterin氨基蝶呤BSAbovine serum albumin牛血清白蛋白DMEMDulbecco’s modified Eagle’smediumDMEM培 养基DMSODimethyl sulfoxide二甲基亚砜ELISAenzyme-linked immunosorbent assay酶联免疫吸附法FCAFreund’scomplete adjuvant弗氏完全佐剂FICAFreund’s incomplete adjuvant弗氏不完全佐剂HAThypoxanthine, aminopterin andthymidineHAT培养基HEPESN-2-hydroxyethl piperazine-N’-ethanesulfonicAcidN-2羟 乙基呱嗪 N’-乙 磺酸HGPRThypoxanthine-guaninep hos-phoribosyltransferase次黄嘌呤 -鸟嘌呤磷酸 核糖转移酶HRPhorseradish peroxidase辣根过氧化物酶HThypoxanthine and thymidineHT 培养基IC50Inhibitory concentration 50%50%抑制浓度McABmonoclonal antibody单克隆抗体PEGPolyethylene glycol聚乙二醇SDSsodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gelelectrophoresis十二烷基硫酸钠 -聚丙稀 酰胺凝胶电泳TMBtetramethyl benzidin四甲基联苯胺目录摘要………………………………………………………………………………… 1ABSTRACT………………………………………………………………………2前言………………………………………………………………………………… 3研究内容…………………………………………………………………………… 71. 雌酮硫酸钠单克隆抗体的制备…………………………………………… 71.1 试剂、材料及仪器……………………………………………………71.2 试验方法………………………………………………………………111.3 结果……………………………………………………………………271.4 讨论……………………………………………………………………372. 雌酮硫酸钠单抗时纸条研制………………………………………………392.1 试剂、材料及仪器……………………………………………………392.2 试验方法………………………………………………………………392.3 结果……………………………………………………………………432.4 讨论……………………………………………………………………46小结………………………………………………………………………………… 48致谢………………………………………………………………………………… 49参考文献…………………………………………………………………………… 50综述………………………………………………………………………………… 55攻读硕士期间发表的学位论文…………………………………………………… 62导师评阅表………………………………………………………………………… 63孕马尿雌酮硫酸钠单抗研制及检测试纸条制备方法研究 研 究 生 ： 阿 曼 古 力 ·托 洪 尔 别 克导 师 ： 高 晓 黎教授 摘要目的 ： 研 制 雌 酮 硫 酸 钠 单 克 隆 抗 体 ， 研 究 建 立 检 测 孕 马 尿 中 雌 酮 硫 酸 钠 的 简 单 ， 快 速 ， 方 便 的 胶 体 金 免 疫 层 析 试 纸 条 的 方 法 ， 为 马 产 业 后 续 的 工 作 提 供 所 收 集 的 每 一 批 尿 液 中 结 合 雌 激 素 的 初 步 检 测 含 量 。方法 ：1.选择 12只 6~8 周 龄 的 BALB/c雌 性 小 鼠 进 行 免 疫 ，研 究 了 免 疫 方 式 、免 疫 剂 量 及 免 疫 次 数 对 免 疫 效 价 的 影 响 。 2.选择 6只 BALB/c雌 性 小 鼠 ， 以 200/100μg/只 ， 免 疫 四 次 。 用 ELISA 法筛选血清效价 高，高抗体敏感性的小鼠。 3. 在 50% 聚 乙 二 醇 1450(PEG)的 作 用 下 ， 将 高 效 价 小 鼠 脾 细 胞 与 骨 髓 瘤 细 胞 进 行 融 合 (脾细胞： 骨 髓 瘤 细 胞 =10:1)并 接 种 于 24 h前 准 备 的 饲 养 层 细 胞 培 养 板 中 ，HAT培 养 液 对 融 合 细 胞 进 行 选