孕激素核受体a b亚型在卵巢癌中作用及机制-role and mechanism of progesterone nuclear receptor subtype a b in ovarian cancer.docxVIP

孕激素核受体 A、B 亚型在卵巢癌中的作用及机制中文摘要目的：本研究通过检测孕激素核受体 A、B 亚型（Progesterone receptor isoforms A and B, PR-A, PR-B）在正常输卵管伞端(Umbrella of normal fallopian, UNF)、卵巢交界性浆液性 囊腺瘤（Ovarian borderline serous cystadenoma, OBSC）、卵巢浆液性囊腺癌（Ovarian serous cystadenocarcinoma, OSC）中的表达。探讨其在 OSC 发生、发展中的作用及与临 床病理特征的关系。以及探讨 PR-B 对卵巢癌细胞影响及与 PI3K/AKT 信号通路之间的 关系，为卵巢癌的生物学治疗提供新的理论基础。 方法：采用免疫组织化学Elivision法检测22例UNF、22例OBSC、52例OSC中PR-A、PR-B 蛋白的表达情况。以人卵巢癌细胞OVCAR-3为研究对象：（1）设计和合成针对PR-B的 siRNA 。 (2) 用 LipofectamineTM2000 脂质体将 PR-B FAM-siRNA 转染进入卵巢癌细胞 OVCAR-3，流式细胞仪分别检测不同终浓度50nmol、100nmol、200nmol的转染率。选 择转染率高转染浓度转染细胞，于转染12小时后做荧光检测和拍照，于转染48小时后做 细胞免疫组化检测沉默效果。（3）对照组为未转染组：对照组1：空白组；对照组2： LY组；对照组3：LY+MPA组；对照组4：MPA组。实验组为转染组：实验组1：空白组； 实验组2：LY组；实验组3：LY+MPA组；实验组4：MPA组。（4）MTT法检测各组细胞 的存活率；AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率；RT-PCR检测各组 细胞XIAP mRNA、AKT mRNA的相对表达量；Western Blot检测各组细胞XIAP、P-AKT 蛋白表达情况。结果：PR-A蛋白在UNF, OBSC和OSC中阳性率分别为94.5％（21/22）、94.5％（21/22）、 68.38％（34/52），三组总体相比差异有显著性（P﹤0.05）。PR-B蛋白在UNF、OBSC 和OSC中阳性率分别为100％（22/22）、77.27％（17/22）、40.38％（21/52），三组总 体相比差异有显著性（P﹤0.05）。三组中PR-A/PR-B的比值总体比较差异有显著性（P﹤0.05）。PR-A、PR-B蛋白在OSC随着分期和组织学分级的增高而表达率逐渐下降，Ⅰ/Ⅱ 期与Ⅲ/Ⅳ期比较、低级别与高级别比较，差异均有显著性（P﹤0.05）。PR-A/PR-B比 值在低级别与高级别中相比，差异有显著性（P﹤0.05）。PR-B表达在OSC有、无淋巴 结转移组间比较，差异有显著性（P﹤0.05）。PR-A、PR-B在OSC组织中表达呈正相关（r=0.33，P﹤0.05）。（1）存活率，对照组 1、对照组 2、对照组 3、对照组 4 结果分别是：100 %、83.43 %、 83.19 %、82.79 %，对照组 4 中细胞存活率最低，而对照组 1 最高。说明 MPA 与 LY 相 似，对卵巢癌细胞有抑制增殖的作用。实验组 1、实验组 2、实验组 3、实验组 4 结果分 别是：98.31 %、82.03 %、80.78 %、97.89 %，实验组 1 与实验组 4 细胞存活率均高于 实验组 2 和实验组 3，说明沉默 PR-B 后 MPA 抑制卵巢癌细胞增殖的作用消失。（2） 凋亡率，对照组 1、对照组 2、对照组 3、对照组 4 结果分别是：11.41±0.52、27.82±0.6、 28.29±0.5、34.33±1.48，对照组 1 凋亡率最低，而对照组 4 凋亡率最高，说明 LY 和 MPA 都有促进卵巢癌细胞凋亡的作用。实验组 1、实验组 2、实验组 3、实验组 4 结果分别是： 11.56±0.49、26.86±0.76、26.69±0.63、10.47±0.53；实验组 4 凋亡率最低，说明沉默 PR-B后 MPA 促进癌细胞凋亡的作用消失。（3）XIAP、AKT 基因 mRNA 的表达结果。AKT mRNA 在对照组 1、对照组 2、对照组 3、对照组 4 结果分别是：10.81±2.23、5.12±.66、 5.63±1.71、4.33±1.73；XIAP mRNA 在对照组 1、对照组 2、对照组 3、对照组 4 结果分 别是：10.56±2.73、6.08±1.61、5.61±2.39、5.01±1.34，AKT 和 XIAP 在对照组 1 表达量最高，对照组 4 表达量最低，说明 LY 和 MPA 可抑制 A