P450药酶代谢体系中纳米金的离散表征及其对2D6活性的影响.pdf

m舢0㈣帅洲删舢咖堋I Y2149140 摘要 随着纳米技术的发展，金纳米粒子被越来越多的应用到生物传感 及医药领域中，在推动社会发展的同时暴露于人体及环境中的机率也 随之增大，因此纳米金的安全性已成为一个现实性问题。位于肝脏的 细胞色素P450酶系在催化药物生物转化过程中发挥着至关重要的作 用。因此将两者结合运用体外代谢体系研究金纳米粒子与细胞色素 P450酶的相互作用对于探讨纳米金的安全性问题具有一定的生物学 意义。有机相．水相均相体系是生物学中应用最为广泛的体系，为了 达到更加快速直接的分析有机物质(大部分被分析物的属性)，减少 基质效应等目的，在仪器分析前纳米金的前处理必不可少。另一方面 在目前为止毛细管电泳由于其独特的优势，是分析生物大分子及分离 纳米粒子最为常用并且有效的分析手段。基于上述原因，本文在无机 盐诱导乙腈一水分相的基础上建立了一种相转移快速分离纳米金的生 物样品简易净化方法；在上述前处理的基础上初步考察了纳米金对细 胞色素P4502D6活性影响的浓度效应和尺寸效应；考察了毛细管电 泳技术在细胞色素P450酶系和纳米金分离中的应用，为探讨二者相 互作用机理提供一种方法学尝试。 本论文的主要工作如下： 1在无机盐诱导乙腈／水均相体系分相的基础上，建立了一种相 转移快速分离纳米金胶体的生物样品简易净化方法。考察了氯化钠， 氯化镁，硫酸镁，硫酸钠四种无机盐对小(5nm)，中(50m)，大 (100 nm)三种尺寸纳米金胶体的聚沉程度影响；考察了孵育时间对 无机盐诱导胶体金聚沉效果的影响；考察了无机盐加入量对此前处理 效果影响；应用透射电子显微镜(TEM)及紫外一可见吸收光谱仪观 察聚沉前后纳米金胶体的形貌变化。最后将该前处理方法应用于血 清、肝药酶复杂生物体系中右美沙芬及其代谢产物去甲右美沙芬的定 量测定，取得了令人满意的结果。 2在上述方法的基础上，以右美沙芬为特异性底物，考察了5、 7、10、20、50、100 m不同尺寸纳米金胶体在不同浓度下对细胞色 素P4502D6酶活性影响。通过IC50测定试验，发现纳米金对细胞色 素P4502D6酶活性的影响呈现浓度依赖性特点，具有明显的尺寸效 应，这对探讨纳米金对细胞色素P450酶的调节及其潜在毒性具有重 要的参考意义。 3以毛细管电泳为主要检测手段，建立了快速测定非那西汀，对 乙酰氨基酚，右美沙芬，去甲右美沙芬的区带毛细管电泳测定方法； 考察了场强放大进样在线富集技术对毛细管电泳灵敏度提高的影响； 考察了纳米金在毛细管电泳中的分离行为。为深入探讨纳米金．细胞 色素P450相互作用提供一种方法学尝试。 关键词：无机盐诱导相分离，纳米金胶体，细胞色素P450酶，抑制 剂，毛细管电泳 ABSTRACT asoneofthemost Gold haVebeen used nanoparticleswidely as nanodevicesina offieldssuch versatile variety tothe isof fieldsandso properties．It on，due uniquephysico—chemical onthehuman concemthat alsocauseadVerseeffects body great theymay