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DC与CIK抗肿瘤作用研究进展 　　【摘要】 树突状细胞(dendritic cell,DC)是已知的效能最强的抗原呈递细胞(antigen presenting cells,APC)，可有效的刺激幼稚T细胞活化和诱导特异的抗原免疫反应，从而将先天和获得性免疫有机联系在一起，是免疫反应的始动者。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK)是由IL-2、IFN-γ和CD3单克隆抗体等诱导而成的对多种肿瘤细胞具有杀伤活性的细胞毒性T淋巴细胞，其溶瘤活性具有非MHC限制性。 　　【关键词】 树突状细胞；细胞因子诱导的杀伤细胞；肿瘤疫苗；免疫治疗 　　 　　1973年Steinman和Cohn首次发现DC，因其表面的指状突起称其为树突状细胞。DC已被证明是目前发现的功能最强大的APC。它可有效的诱导静止T细胞增值和应答，促进细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes，CTL)和辅助性T淋巴细胞的生成，是机体免疫反应的启动者和参与者[1]。CIK细胞是人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子与CD3 mAb共同培养后获得的一群异质细胞[2]。CIK 具有T 淋巴细胞的抗肿瘤活性和N K细胞的非MHC 限制性杀瘤活性。将具有高效杀伤活性的CIK细胞和具有强大肿瘤抗原递呈能力的DC联合应用于治疗恶性肿瘤，有助于解除肿瘤患者T细胞免疫无能，起到抗肿瘤作用[3]。 　　 　　1 DC在抗肿瘤中的作用 　　 　　骨髓中的DC前体细胞释放至外周血后迁移到外周非淋巴组织，具有很强的抗原摄取能力，能有效的捕获、加工内源性和外源性抗原，在此过程中DC的表面标志及功能发生改变，共刺激分子CD80、CD86等表达水平增高，捕获抗原的能力降低，抗原提呈能力明显增强，成为成熟DC。成熟DC高表达MHCⅠ、MHCⅡ类分子，分别与捕获加工的内源和外源性抗原结合形成抗原肽复合物，在DC表面表达，提呈给T细胞，共刺激分子与其配体结合，为T细胞的活化提供第二信号，并与T细胞受体接受的抗原第一信号共同作用，刺激T细胞活化，从而启动CTL反应和CD4+Th1反应[4]。 　　肿瘤的发生与DC数量的减少和功能的缺陷关系密切。2005年Yilmaz T等[5]发现，患者体内的DC数量与肿瘤的临床分期及周围浸润呈负相关。主要原因在于：肿瘤细胞直接接触DC抑制其成熟；肿瘤细胞释放多种影响DC成熟和功能的细胞因子，如VEGF、IL-10等；肿瘤细胞的免疫原性减弱，MHC类分子表达异常，DC缺乏共刺激因子的表达，致使T细胞不能被激活，最终导致了免疫耐受和肿瘤免疫逃逸。 　　 　　2 DC的培养及疫苗类型 　　 　　当前多用外周血单核细胞在GM-CSF和IL-4等诱导培养成为具有抗肿瘤作用的成熟DC。Dauer M等[6]报道，用常规细胞因子组合培养外周血CD14+细胞，48 h后便可成功获得成熟DC。此法获得的DC与常规方法所得到的DC具有同样的形态学特点，免疫表型分子的表达百分率相似，且缩短了培养时间，减少了培养体系污染几率，并避免反复冻存对细胞的影响，同时减少费用，具有未来研究和治疗应用的使用价值[7]。 　　目前在临床应用的DC疫苗主要有：①肿瘤全细胞抗原负载的DC疫苗，用肿瘤细胞裂解物、凋亡肿瘤细胞及活细胞等方法，使DC负载多价肿瘤抗原，避免了呈递单一抗原导致的免疫逃逸，但是此法有诱发自身免疫性疾病的危险；②肿瘤抗原肽负载的DC疫苗，能诱导具有肿瘤抗原特异性性的免疫反应；③肿瘤细胞RNA、DNA负载的DC疫苗，可持续的将肿瘤抗原表位表达于DC表面，有效的激活T细胞产生抗肿瘤效应。但目前已知的抗原决定簇不多，使得临床应用受到了限制；④DC与CIK细胞联合应用，2005年张锦英等[8]研究抗原负载的DC联合CIK治疗晚期胃癌的结果显示，患者症状明显减轻，机体免疫功能得到了改善，且无明显的不良反应，进一步证实了DC与CIK联合应用的临床意义。 　　 　　3 CIK的生物特性 　　 　　Schmidt-wolf等[9]于1991年首次发现在外周血淋巴细胞(PBL)中加入IFN-γ、IL-2和CD3 mAb，可培养出大量CD3和CD56双阳性T细胞，是非MHC限制性细胞毒性淋巴细胞[10]，兼具有T淋巴细胞的抗肿瘤活性和NK细胞的非限制性杀瘤活性，称其为CIK。 　　T细胞可分为Thl和Th2类细胞，Thl类细胞因子的主要作用为增强机体的细胞免疫功能，Th2类细胞因子则主要对体液免疫起作用[11]。CIK细胞经培养后可分泌大量的Thl类细胞因子[12]，如IL-2， IFN-γ及IL-12，可调节体内其他细胞因子的分泌以促进肿瘤细胞对CIK杀伤作用的敏感性；CIK可通过上调肿瘤细胞