MMP-9及TIMP-1在功能失调性子宫出血中作用.docVIP

MMP-9及TIMP-1在功能失调性子宫出血中作用 　　【摘要】目的：探讨基质金属蛋白酶9（MMP-9）及基质金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）与功能失调性子宫出血（功血）的关系。方法：应用RT-PCR技术检测MMP-9及TIMP-1 mRNA的表达量。结果：功血复杂性、单纯性增生组子宫内膜组织中MMP-9 mRNA的表达均显著高于正常对照组，而二者TIMP-1mRNA的表达量则明显低于正常组（P 　　【关键词】功能失调性子宫出血；基质金属蛋白酶；基质金属蛋白酶抑制物；子宫内膜 　　文章编号：1009-5519（2008）11-1584-03 中图分类号：R71 文献标识码：A 　　 　　研究表明，功能失调性子宫出血(简称功血)发生的更直接原因可能是在激素的调节下子宫内膜局部微环境（血管活性物质、生长因子、性激素受体、细胞凋亡等[1]）发生改变。MMP-9可以降解子宫内膜细胞外及间质的多种成分，并通过其他途径诱导细胞凋亡，造成子宫内膜细胞外基质突破。本实验通过应用RT-PCR技术对功血患者及正常子宫内膜组织中MMP-9、TIMP-1mRNA表达量进行对照研究，探讨MMP-9及TIMP-1之间关系的改变在功血发生发展中的作用。 　　 　　1 资料与方法 　　 　　1.1 一般资料与分组：标本分两组，要求患者1年内均无宫内置环史，3个月内未服用过激素类药物。病例组36例，2005年1月~2007 年10 月来我院门诊首诊并刮宫送病检的功血患者，平均（39±1）岁，按世界卫生组织（1994年）制定的标准分型，单纯性增生22例、复杂性增生14例。对照组15例，为同期因肌壁间子宫肌瘤在我科行子宫切除术且月经周期正常患者，平均（41±3）岁。 　　1.2 检测方法：于刮宫（或子宫离体）后5分钟内迅速取子宫内膜组织，立即置入液氮中冷冻，4小时后再转入-70 ℃低温冰箱保存备用。首先利用RNA-OUT（日本Ta KaRa公司产品）试剂盒完成总RNA的提取，然后利用Ta KaRa公司的BcaB EST RNA PCR Kit按照说明完成cDNA合成，应用软件Primer5.0设计引物，由日本Ta KaRa公司合成，引物序列: MMP-9：上游5-CAGCTGTATTTGTTCAAGGATGG-3，下游 3- GGCTCCGCAGACCTGTTC-5，片段长度222Bp；TIMP-1：上游5TGCACCTGTGTCCCACCCCACCCACAGACG 3，下游5GGC TAT CTG GGA CCG CAG GGA CTG CCA GGT 3；片段长度552bp; β-actin：上游5-TGGCATCCACGAAACTACCTT-3，下游3- CGTTCGTCCTCATACTGCTCAG-5，片段长度279 bp。分别定量1 μg cDNA为模板进行PCR 扩增反应，PCR参数为94 ℃变性 30 s，57 ℃退火40 s，72℃延伸1 min，35个循环后，72 ℃延伸10 min，PCR扩增产物在1.5%琼脂糖（美国Promega公司产品）凝胶上进行电泳。结果分析：应用凝胶成像系统摄取各样本在同一凝胶上的电泳图，通过Fluorchem V2.0Stand Alone软件得出每一泳道中PCR产物条带的光密度值，计算产物条带的光密度的相对比值，通过比较最终得出各标本中MMP-9，TIMP-1mRNA表达的相对含量。 　　1.3 统计学处理：应用美国SPSS11.0统计软件分析系统。资料采用F检验后进行t检验比较差异。 　　 　　2 结果 　　 　　2.1 各组子宫内膜组织中MMP-9 mRNA的表达量比较：功血组单纯性增生子宫内膜组织中MMP-9 mRNA的表达量为0.94±0.03，复杂性增生子宫内膜组织中MMP-9 mRNA的表达量为1.12±0.05，对照组子宫内膜组织中MMP-9 mRNA的表达量为 0.49±0.06，功血单纯性增生和复杂性增生组子宫内膜组织中MMP-9 mRNA表达量明显高于正常对照组，差异有显著性（P 　　本实验结果不仅显示功血患者子宫内膜组织中MMP-9 mRNA的表达明显高于正常子宫内膜组织中的表达，TIMP-1 mRNA的表达量则明显低于正常组。正常EMC的合成与降解处于一个动态平衡之中，MMPs与TIMPs的平衡是维持EMC内环境稳定的决定因素。在健康个体，MMP-9和TIMP-1以1∶1的比例共同释放。本实验结果显示MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达明显失衡，而且复杂增生比单纯增生更加严重，该结果与文献报道一致。其原因可能是无排卵型功血患者的低孕激素的、单一持续的高雌激素水平激活了原MMP-9，使MMP-9合成增加，引起间质水肿，炎细胞反应可导致细