大鼠尿液中蝶呤类化合物及氨基酸分析方法的研讨及其应用.pdfVIP

摘要 摘要 据国内外文献报道，蝶呤类及氨基酸类化合物参与生物体新陈代谢，并在 其中扮演重要角色。当受到癌症或其它疾病侵害时，其在体液中的含量往往会 发生改变，有可能作为癌症早期诊断标志物。本文从体液中蝶呤类化合物及氨 基酸类化合物的分析测定方法、样品前处理技术、与肿瘤相关性研究及膀胱癌 模型建立等四个方面的研究现状进行了综述。在此基础上，运用色谱分析技术， 建立了大鼠尿液中黄蝶呤、异黄蝶呤、酪氨酸及色氨酸的同时分析方法，并应 用在大鼠膀胱癌模型尿液的检测，对膀胱癌肿瘤标志物进行了初步的探索。其 主要研究成果如下： 1．目的 使用N．丁基．N．(4．羟丁基)．亚硝基胺(BBN)诱发建立大鼠膀 胱癌模型，并对病理学诊断结果和核磁影像(MⅪ)诊断结果进行比较。方法将 112只6周龄的SD大鼠按体重随机分为两组，其中对照组42只大鼠，模型组 70只大鼠。适应性饲养一周后开始对模型组进行癌症模型造模，将模型组大鼠 每天给与含0．05％BBN的饮用水自由饮用，对照组给与普通自来水自由饮用。 实验持续BBN给药35周，每隔5周对模型组大鼠和对照组大鼠进行M对扫描 及病理学检查。实验结束后处死所有动物进行病理学检查。结果第15周时， 模型组大鼠病理学检查发现肿瘤细胞具有一定异型性，判定为膀胱癌，而M刚 扫描膀胱壁完整光滑，未见异常。第25周时，模型组大鼠MⅪ扫描发现膀胱壁 增厚，膀胱低信号带表浅处被肿瘤中等信号侵润并且密度不均匀，诊断为膀胱 癌。35周所有模型组大鼠的病理学检查均为膀胱癌，对照组大鼠在整个实验过 程中经MⅪ扫描均未发现肿瘤组织，病理检查结果显示正常。结论用BBN化 学诱导建立大鼠膀胱癌模型十分简便，成瘤率高；病理学检查诊断膀胱癌较MⅪ 诊断早。 2．建立了大鼠尿液中黄蝶呤、异黄蝶呤、酪氨酸和色氨酸的UPLC．DAD分 析方法，选择肌酐作为内标物来减少个体差异的影响。大鼠尿液利用甲醇除蛋 白后，采取C18固相萃取小柱进行净化，然后用UPLC．DAD法进行测定，五种 1 物质的仪器检测限分别为O．01mg／L、0．007mg／L、0．030mg／L、0．025mg／L和 0．003 mg／L，加标回收率除黄蝶呤在60．8％～80．7％之间，其余各物质回收率均在 96．3％～106．3％之间，RSD小于9．85％。 摘要 3．建立了大鼠尿液中黄蝶呤、异黄蝶呤、酪氨酸和色氨酸的UPLC．FLD分 析方法，大鼠尿液利用甲醇和乙腈除蛋白后，采取C18固相萃取小柱进行净化， 然后用UPLC．FLD法进行测定，四种物质的仪器检测限分别为5 I．tg／L、O．3“∥L、 4“∥L和2gg／L，加标回收率除黄蝶呤在61．1％～78．0％之间，其余各物质回收率 均在85．0％～110．O％之间，RSD小于10．2％。 4．建立了大鼠尿液中肌酐、黄蝶呤、异黄蝶呤、酪氨酸和色氨酸的 UPLC．DAD．FLD分析方法，大鼠尿液利用甲醇和乙腈除蛋白后，采取C18固相 萃取小柱进行净化，然后用UPLC．DAD．FLD法进行测定，五种物质的仪器检测 限分别为5,g／L、5gg／L、0．3gg／L、10肛∥L和3“g／L，加标回收率除黄蝶呤在 方法应用于大鼠膀胱癌模型的测定，发现随着膀胱癌的发生发展，黄蝶呤、异 黄蝶呤、酪氨酸和色氨酸均有变化，其中异黄蝶呤的变化最为显著。 关键词：肌酐；黄蝶呤：异黄蝶呤；酪氨酸；色氨酸；大鼠膀胱癌模型；尿液； 超高效液相色谱；荧光检测器；二极管阵列检测器 ABSTRACT ABSTRACT tothe inthe andaminoacidswereinvolved According reports literature，pterins inand an roleinthemetabolismof the playedimportant organisms．Whenliving