季戊四醇类和三羟甲基丙烷类阳离子脂质体的合成及其基因转染效力评价.pdfVIP

摘要 非病毒载体具有低毒低免疫反应以及使用简单、制备方便、便于 保存和检验等潜在优势，而成为基因药物转移载体的研究热点。阳离 子脂质体作为非病毒基因载体通过静电吸附与基因药物形成二元复 合物，能被网状内皮吞噬而被动靶向到各组织细胞中，对其结构进行 修饰，可增加阳离子脂质体的主动靶向性。 ● 本论文合成了两类阳离子脂质。一类以季戊四醇为原料，通过异 丙叉基化、醚化、去异丙叉基、烯丙基化、碘代、叔胺化和季铵盐化 反应，合成具有不同疏水链长度、不同阳离子头部的六种季戊四醇类 12、TMA．PER_坊．C14、 阳离子脂质TMA-PER-di—C8、TMA—PER—di．C HEDMA．PER—di-C8、HEDMA—PER-d／．C1 14。 2和HEDMA—PER-d／一C 另一类阳离子脂质则以三羟甲基丙烷为原料，通过威廉姆森醚化、碘 代、叔胺化和季铵盐化反应，合成具有不同疏水链长度、不同阳离子 头部的六种三羟甲基丙烷类阳离子脂质TMA．TMP．di-C12、 1 l6、HEDMA—TMP．di—C12、 TMA—TMP—di-C4、TMA．TMP．di．C HEDMA．TMP．di．C14和HEDMA—TMP．di．C16。 采用超声波分散技术，将合成的阳离子脂质制备成阳离子脂质 体，再与装载EGFP的质粒DNA混合制成脂质体／DNA二．元复合物。通 过凝胶阻滞实验，研究阳离子脂质体与质粒DNA的结合能力以及确 定脂质体／DNA复合物的N／PLI,。研究结果表明，随着脂质体／DNA复 比增至6时，各脂质体与质粒DNA完全结合。采用Zeta电位分析仪， 表征阳离子脂质体和脂质体／DNA二元复合物的粒径、粒径分布和 的平均粒径分别为726．1nm和712．5nlTl，因平均粒径偏大而不适于细 胞转染。其他十一种阳离子脂质体的平均粒径在120—240nin之间，相 应DNA复合物的平均粒径在130．270nnl之间；且单一阳离子脂质体带 正电，Zeta电位在45 mv左右， mv左右，其DNA复合物Zeta电位在30 适用于细胞转染。 以商用转染试剂Lip02000为阳性对照，考察两类阳离子脂质体携 载报告基因(绿色荧光蛋白基因质粒)在HEK293细胞系内的表达情 况，并通过细胞计数测定各阳离子脂质体的转染效率。研究结果表明： TMA—PER-d／-C1 1 2、TMA—TMP．di-C2、HEDMA．PER-d／．C12和 与Lip02000相当。其他四种脂质体无转染。季戊四醇类阳离子脂质体 的转染效率随疏水链长度增加而升高；疏水链长度相同，当脂质体亲 水性增强时，转染效率降低。三羟甲基丙烷类阳离子脂质体最佳疏水 链为十四烷基；疏水链长度相同，脂质体的转染效率随亲水性增强而 升高。 在两种细胞系中转染效率与Lip02000相当，其他三种脂质体转染效率 较低，甚至无转染。TMA．PER-di-C14作为基因载体具有制备简单、 转染效率高的特点。 关键词：季戊四醇类阳离子脂质体，三羟甲基丙烷类阳离子脂质体， 基因载体，转染效率。 IIl ABSTRACT Non-viralvectorshavethe oflow advantagestoxicity,low potential immune to and response，simpleuse，easypreparation，easypreservation facilitate