《微生物与发酵工程》第2章 微生物菌种选育1、2节.ppt

第二章 微生物菌种选育 第一节 菌种的来源 一、工业发酵常用微生物种类 细菌 细菌是自然界中分布最广、数量最多、与人类关 系最为密切的一类微生物，也是发酵工业上使用 最多的一种单细胞生物。发酵工业上常用的细菌 大多是杆菌，主要包括： 醋酸杆菌（Acetobacter） 主要用来生产醋酸、食醋、葡萄糖酸和维生素C。 假单胞菌（Pseudomonas） 生产2-KGA，甾体转化等。 一、工业发酵常用微生物种类 细菌 乳酸菌（Lactobacter） 生产各种乳酸产品及乳酸菌产品。 大肠杆菌（Escherichia coli） 某些氨基酸和酶制剂，分子生物学材料。 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 主要生产淀粉酶和蛋白酶。 梭状芽孢杆菌（Clostridium） 发酵生产丙酮丁醇 棒杆菌和短杆菌（Corynebacterium）（Brevibacteriaceae）生产谷氨酸和赖氨酸。 一、工业发酵常用微生物种类 酵母菌 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） 酿酒、生产面包、分子生物学材料 异常汉逊氏酵母 （Hansenula anomala） 产生乙酸乙酯，有増香能力 假丝酵母（Candida） 石油脱蜡，生产SCP 毕赤氏酵母和汉逊氏酵母（Pichia）（Hansenula）酿造工业的有害菌，基因工程宿主 一、工业发酵常用微生物种类 霉菌 曲霉属（Asprgillus） 生产酶制剂和有机酸 青霉属（Penicillium） 生产青霉素 根霉属（Rhizopus） 用作糖化菌、生产酒药和酒曲 毛霉属（Mucor） 生产蛋白酶，生产腐乳、酱油 一、工业发酵常用微生物种类 放线菌 生产各种抗生素 担子菌 食用和药用 藻类 食用、石油植物 二、工业微生物的来源 参见绪论部分 三、微生物菌种的选择性分离 （一）含微生物样品的采集 采集地点的选择 土壤中最多，也可根据微生物的生理特点采样。 采集方法 注意对样品及时处理。 三、微生物菌种的选择性分离 （二）微生物样品的富集培养 控制培养基的营养成分 控制培养条件 抑制不需要的菌类 （三）目的菌种的分离 即微生物学上的平板划线和梯度稀释等纯种的纯 化分离方法。 （四）目的菌的筛选 指对目的菌进行生理生化实验和发酵实验。 三、微生物菌种的选择性分离 （五）未来的发展 教材P52，课下阅读。 第二节 发酵高产菌种选育 一、自然选育 概念 在生产过程中，不经过人工处理，利用菌种的自发突变，从而选育出优良菌种的过程，叫做自然选育。 原因 解决负突变造成的菌种衰退 方法 即分离纯化，重复多次 二、诱变育种 概念 诱变育种是利用物理或化学诱变剂处理均匀分散的微生物细胞群，促进其突变率大幅度提高，然后采用简便、快速和高效的筛选方法进行筛选的育种方法。 二、诱变育种 （一）诱变育种的原理 利用各种诱变剂造成目标菌的基因突变或染色体 畸变，增加高产（或其他目标性状）出现的几率， 再以某种有针对性的筛选方法将其筛选出来。 常用的诱变剂包括物理、化学和生物的三大类， 见表1-1。 二、诱变育种 （二）诱变育种的基本方法 出发菌株的选择 本身性状具有相应优势 最好来源于生产线 制备菌悬液 菌龄年轻 分布均匀 单倍化（避免出现表型延迟现象） 诱变处理 二、诱变育种 （二）诱变育种的基本方法 诱变处理 先确定致死剂量 选择合适的诱变剂量 选择合适的诱变条件 最好进行复合诱变处理 突变菌株的筛选 营养缺陷型突变菌株的筛选 采用营养谱法 抗反馈阻遏和抗反馈抑制突变菌株的筛选 选育结构类似物抗性突变株，见例1-1. 二、诱变育种 选育营养缺陷型的回变菌株 组成型突变株的筛选 选择性培养法 交替培养法 利用显色反应 抗性突变株的筛选 抗生素抗性突变 解除自身抑制或利用某种代谢联系 噬菌体抗性突变 条件抗性突变（常为温度） 敏感突变 （常为某酶的抑制剂） 三、杂交育种 概念 杂交育种一般是指人为利用真核微生物的有性生殖或准性生殖，或原核微生物的接合、F因子转导、转导和转化等过程，促使两个具不同遗传性状的菌株发生基因重组，以获得性能优良的生产菌株的育种方法。见表1-2. 杂交育种相对诱变育种更温和且更具目的性，但不能产生高产性状，故主要用作高产性状的组合和诱变育种的补充。 四、原生质体融合 概念 原生质体融合是通过人工方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体发生融合，并产生重组子的过程，亦可称为细胞融合。 步骤 选择亲株 优势互补、有遗传标记 原生质体制备 预处理后设法去除细胞壁 四、原生质体融合 步骤 原生质体融合 设法促使原生质体融合，如PEG介导