《分子生物学常用技术在中医药研究中的应用》实验课 0506 酶切重组质粒，电泳，从凝胶中回收DNA.pptVIP

* * 实验 4 酶切重组质粒 电泳分离所插入的DNA 目 的 1．鉴定。鉴定所培养的单菌落中是否含有重组质粒，或仅含有自身环化的质粒。当酶切产物电泳后，重组成功者电泳后会出现大小不等的两条DNA条带，一条为线性质粒载体的DNA，分子量大，在后面，另一条为插入的目的基因，分子量小，在前面；而自身环化者仅有一条载体的DNA条带。 2．收获。通过电泳分离，使载体与插入目的基因分开，便于分别回收载体和已大量扩增了的插入目的基因。比如探针用片段。 本实验由2个部分组成： （1）酶切重组质粒； （2）DNA的琼脂糖凝胶电泳。 ● 关于限制性内切酶 本实验选用的限制性内切酶是分子生物学中最为常用的工具酶。通常不同的限制性内切酶分别能识别一小段双链DNA序列，长度多在4～6个核苷酸，且呈双重对称的DNA序列，并将其切断。有粘端和钝端两种形式： EcoR I ↓ 5...GAATTC...3 → 5...G AATTC...3 3...CTTAAG...5 3...CTTAA G...5 Pst I ↓ 5...CTGCAG...3 → 5...CTGCA G...3 3...GACGTC...5 3...G ACGTC..