荧光探针法疾速测定游离态氨基酸的含量及应用.pdfVIP

摘要 氨基酸是组成各种生命体所需要的各种蛋白质的最基本的单元，畜牧业中的饲料、 各种食品等的营养成分，在医学上也常用于治疗多种疾病，同时不同种类的氨基酸也是 化妆品的有效成分以及在合成表面活性剂、药物等其他工业产品的非常重要的化工原 料。所以，发展氨基酸的定性及定量分析检测技术在工农业生产及生命科学领域的研究 中有着重大的意义。目前对于氨基酸的定性定量分析测定方法有：化学法(包括甲醛滴 定法和凯氏定氮法)、分光光度法、薄层色谱法、液气相色谱法、毛细管电泳法、电化 学法以及自动氨基酸分析仪等。但上述所列举的分析方法基本都存在分析时间特别长、 操作过程过于复杂等缺点，与上述分析测定方法相比，荧光光谱法有很多优点：例如快 速、非常高的灵敏度、样品消耗量少等。而近些年发展迅速的荧光探针法与其他分析方 法相比具有灵敏度非常高、响应范围宽的优点。因此建立灵敏度高、检测限低的荧光光 谱法用于定性定量测定氨基酸具有非常重要的现实意义。 本论文主要从以下三个方面介绍了本人在研究生阶段的研究成果包括： 1．综述了氨基酸的分类与作用，以及检测氨基酸含量的方法及其应用，概述了荧光 光谱法的基本原理，。 2．探讨了用三科Pd2+复合型荧光探针法测定三种游离态氨基酸的含量：①在pH为 灭，当加入一定量的L．异亮氨酸后，L．异亮氨酸能够矛[IPd2+形成一个更稳定的络合物 pd2+-L．异亮氨酸，从而解离出游离态的吖啶红分子，从而能使测定体系的荧光强度增加， 并且荧光强度的增加强度和加入的L．异亮氨酸的量在一定范围内呈良好的正相关关系。 基于此现象，我们建立了一种用一种复合型荧光探针定量检测L．异亮氨酸的方法。当在 的幅度与加入的L．精氨酸的量成正比关系，从而建立了一种用复合型荧光探针法定量测 定L．精氨酸含量的方法，而且在狭缝宽度不一样的情况下，该方法的线性范围和检出限 以及表面活性剂CTMAB存在下，L．亮氨酸能使用pd2+淬灭后的荧光素的荧光强度增强， 且荧光强度增强的幅度与加入的L．亮氨酸的量成线性关系，从而建立了一种用荧光光谱 法测定L．亮氨酸含量的新方法。当激发狭缝宽度为3nm，发射狭缝宽度为5nm时，标准 3．在定量测定以上三种氨基酸含量的同时也研究了以上三种氨基酸与pd2+复合型 荧光探针相互作用的相关机理，研究了荧光探针自身，荧光探针与三种氨基酸的紫外光 谱和荧光光谱，并对其相互作用的机理进行了深入的探讨。 关键词：氨基酸，复合型荧光探针，定量测定，表面活性剂，荧光光谱 ABSTRACT arethebasicelementof whichisessenitialtohuaman arethe Aminoacids protein life．They be nutritionoffeedand Canalso mainmaterialinthe of alsothe food．They synthesisprotein，and asaneffective of usedto andcure Canbeused prevent diseases．Besides．they component andotherindustrial and surfaceactive rawmaterialmedicine cosmetics synthetic agents，chemical isan forthe and detectionofamino importantt