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微生物法测定血浆中万古霉素血药浓度研究 　　【摘要】目的：探讨血浆中万古霉素浓度的微生物测定方法。方法：采用微生物测定法，测定万古霉素血药浓度，枯草芽胞杆菌作为试验菌。结果：万古霉素在1.0~60.0 μg?ml-1范围内，线性关系良好（r=0.9992）；日内、日间相对标准误差在3.3%～4.3%。结论：用微生物法测定万古霉素血药浓度，简便、准确，可用于临床治疗药物浓度监测。 　　【关键词】万古霉素；微生物法；血药浓度 　　文章编号：1009-5519（2008）16-2390-02 中图分类号：R9 文献标识码：A 　　 　　万古霉素是一种糖肽类窄谱抗生素，主要通过抑制细菌细胞壁的合成而发挥迅速杀菌作用，作用部位为抑制细胞壁糖肽的合成，也可能改变细菌细胞膜的渗透性，对革兰阳性菌有效，如金葡菌和表皮葡萄球菌，以及链球菌（包括化脓性链球菌、肺炎链球菌、铜绿假单孢菌）、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌、放线菌、肠球菌、链球菌属、类白喉菌等[1]，对目前医院感染的主要病原菌-耐甲氧西林葡萄球菌具有强大的抗菌活性。临床上主要用于严重的革兰阳性菌感染，特别是多重耐药的葡萄球菌所致的严重感染。万古霉素不良反应多见于耳毒性、肾毒性和血液系统毒性等，临床使用过程中必须严格控制适应证，仔细调整剂量，应进行血药浓度监测，使药物浓度维持在一个安全、有效的范围，以减少不良反应，确保药物疗效。目前国内已多见采用高效液相色谱法测定其血药浓度的报道，笔者应用微生物法测定万古霉素血药浓度，操作简单，为指导临床合理用药提供了依据。 　　 　　1 实验材料 　　 　　万古霉素标准品（中国药品生物制品检定所），磷酸盐缓冲液，按中国药典方法配制（pH6.0）。菌种：枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]。培养基 抗生素检定培养基Ⅰ号（江苏宜兴万石培养基厂）。抗生素效价测定仪（北京先驱威锋技术开发公司），不锈钢小管、打孔器、微量注射器等。 　　 　　2 方法和结果 　　 　　2.1 标准曲线的制备 　　2.1.1 对照品的制备：精密称取万古霉素对照品适量，用灭菌pH6.0磷酸盐缓冲液稀释成1000 μg?ml-1，再用空白人血浆稀释至分别含1.0，2.5，5.0，10.0，20.0，40.0，60.0 μg?ml-1的标准溶液。 　　2.1.2 试验用菌悬液的制备：取枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]，按中国药典2005年版二部附录[2]方法制备。 　　2.1.3 含菌平板制备：将已灭菌的抗生素Ⅰ号培养基加热融化，冷却至55 ℃，加入枯草芽孢杆菌菌悬液适量摇匀，用灭菌吸管吸取20 ml，注入各消毒好的直径为90 mm的抗生素测定专用平皿中均匀摊布，用陶瓦盖覆盖，待制好的平皿冷却凝固后，用直径为3 mm内径不锈钢管打6个孔，挑去孔内琼脂，将标准溶液系列浓度用微量注射器依次注入6个小孔中，每孔25 ?滋l，并予标志，于（36±1）℃恒温培养14~16 h后，取出测量抑菌圈直径D。根据抑菌圈直径（D）大小对抗生素浓度（C）的对数（logC）作线性回归，计算出回归方程为：logC=0.1126X-2.4652，ｒ=0.9991(n=5)。结果表明万古霉素浓度在1.0~60.0 μg?ml-1范围内，线性关系良好。 　　2.1.5 精密度试验：取一定量的血浆，加入不同量的万古霉素标准品，使其浓度分别为5.0，20.0，40.0 μg?ml-1，按标准曲线制备方法，每个浓度重复5次，于（36±1）℃恒温培养14~16 h后，取出测量抑菌圈的直径，代入随行标准曲线，计算血药浓度，测定日内误差；另取上述3种浓度的万古霉素标准溶液，每一浓度按标准曲线制备方法每日在含菌平板上实验，连续5天，测定日间误差。将测定所得抑菌圈直径代入回归方程，计算结果，见表1。 　　2.1.5 回收率实验：取含菌琼脂平板，每个平板分别打孔，按标准曲线方法定量加入中高、中、低（5.0，20.0，40.0 μg?ml-1）3种浓度的万古霉素血浆标准溶液，于（36±1）℃恒温培养14~16 h后取出，测量抑菌圈直径，代入随行标准曲线，计算回收率，结果见表2。 　　 　　2.2 患者万古霉素血药浓度测定：选择成年患者12例，单剂量给予万古霉素1.0 g，以无菌注射用水溶解后，加入5%葡萄糖注射液250 ml，恒速静脉滴注，100 min～2 h内滴注完毕，每日1次。滴注结束后30~60 min取前臂静脉血2 ml，离心。取含菌平板，按2.1.3项下方法操作，取标准曲线中心浓度（20 μg?ml-1）及标准溶液低、高浓度（5.0、40.0 μg?ml-1）作为对照品，另取待测血浆各25 μl分别相间加入3个孔并予以表明，用上述微生物测定法测定血药峰浓度；滴注给药前取前臂静脉血2