飞秒激光显微操作进行单细胞水平的虾青素生物合成的研究（可编辑）.docVIP

飞秒激光显微操作进行单细胞水平的虾青素生物合成的研究 , , . . ?. .. . . 、Ⅳ. . . ... ... .仃.. . : ?独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的 研究成果,除了文中特别加以标注和致谢之处外,论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果,也不包含为获得苤盗苤茔或其他教育机构的学位或证 书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中 作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名:饥键、员签字日期:Ⅻ年月日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解苤盗盘鲎有关保留、使用学位论文的规定。 特授权苤盗盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。 保密的学位论文在解密后适用本授权说明 导师签名: 学位论文作者签名:亿彭乏。男 日 乙日 签字日期:砂.年月 签字日期:劲年月第一章文献综述 第一章文献综述 .单细胞研究 在传统的生物工程中,研究对象都是细胞群体。这种基于细胞群体的研究结 论是集群平均, 的结果,它掩 盖了细胞个体的特性。生物的标志性特征是多样性,具体到细胞上,每一个细胞 在基因型和表型上都不同于其它细胞,即细胞个体异质性 。细胞个体异质性可以分为个层次:基因异质基因组成不完全 相同、生化异质生物化学组成不同、生理异质如细胞的大小、性质等生理 特点不同和行为异质如细胞活性和分裂情况的不同【】。 正是对细胞个体异质性及其重要性的认识,推动了近年来单细胞研究的快速 发展胡】。以单细胞为对象的研究,能揭示如转基因和化学物质的传递等不可见 的生物过程,能探究表现为多细胞行为的生物现象的内部机理。这是传统的基于 群体研究的方法所不能实现的。单细胞技术在研究细胞的生化组成与行为特性的 关系,细胞之间及细胞与环境的关系和胞内反应动力学方面有重要意义。除了基 础研究领域,单细胞研究还能解决应用研究领域的许多问题。因为细胞个体的异 质性在很多研究中都会对实际的结果产生重大影响,如对抗生素的抗性,工业发 酵的产量和稳定性,食品的防腐功效,病原体的致病可能性等。对单细胞的表征、 鉴别和分离,对于病原体的检出、环境微生物的纯化和高产株的筛选尤其有重要 意义。年月日的 将“单细胞分析”评为“十大新 兴技术 ’’之一://..。 目前,单细胞研究正从对单细胞的行为差异如细胞活性和分裂情况的不 同、生理差异如细胞的大小、性质等生理特点不同、生化差异生物化学组成 不同的研究走向在基因层面细胞在基因组成上不完全相同的研究?。随着 单细胞研究的深入,研究方法的集成化成为目前单细胞技术发展的方向【】,其 中以微流控芯片技术为基础的单细胞技术就是典型的代表【,】。年的 ’’中 】指出通过集成技术构建单细胞的多功能研究平台具 一篇“ 有重要的学术意义和应用潜力。我国科学家对单细胞技术的集成研究也极为重 视,山东大学】和中科院大连化物所】都将毛细管电泳和激光诱导荧光. 用于单细胞的免疫反应研究,上海交大将化学发光与毛细管电泳技术.结 合对单细胞的血红素进行了测定】,浙江大学将毛细管电泳和激光诱导荧光与微 流控芯片技术结合使用进行单细胞分析【】,武汉大学将纳米电极电化学及荧光显第一章文献综述 微成像用于监测单细胞释放【】。 单细胞技术的集成化是生物技术研究的需要。目前,单细胞的研究多见于生 物学基础研究及医学研究。在生物工程领域,尤其是工业微生物的应用方面,单 细胞水平的研究还很不够。生物加工过程的研究也需要发挥单细胞技术的优势来 解决深层次的关键问题。比如高产株的选育问题,对许多胞内代谢物无法根据外 在的生理特性筛选高产突变株,用传统的生物技术无法找到有效的解决方法。还 有,与细胞周期有关的生物过程,也只有用单细胞研究的方法才能从根本上解决 问题。 .激光显微操作在生物领域的应用 激光显微操作技术在生物学领域有广泛应用。随着激光技术的快速发展和生 物学研究的不断深入,激光显微操作在生物领域的应用也不断取得新的进展。光 镊的发明为激光显微操作技术带来革命性的变化,这使得激光不仅可以进行切割 和穿刺,而且能够实现对微小物体的捕捉和操纵。近年来,飞秒激光的应用使激 光显微操作技术有了又一次飞跃,能精确地进行微米甚至纳米尺寸的操作。 目前,激光显微操作已经从细胞水平扩展到亚细胞甚至分子水平,已经成为 对活体单细胞和单个生物大分子进行研究的重要工具。 ..激光显微操作系统 , 激光显微操作系统按功能可分为光刀 和光镊 两种。 ...光刀 激光被聚焦成微米级的光斑后,能进行切割和穿刺等 操作,被称为光刀。激光出现之后,很快就作为光刀用于显微外