atpb基因反义寡核苷酸对人卵巢癌skovipl细胞顺铂敏感性影响的初步探讨.docxVIP

复旦大学硕士学位论文ＡＴＰ７Ｂ基因反义寡核苷酸对人卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞顺铂敏感性影响的初步探讨（中文摘要）卵巢癌是妇科常见肿瘤，其死亡率居妇科肿瘤之首。卵巢癌临床治疗采取以手术为主，化疗为辅的综合治疗。但原发性或获得性顺铂耐药是卵巢癌患者生存率提高的主要障碍之一。Ｐ型三磷酸腺苷酶（ＡＴＰＴＢ）是一种铜转运ＡＴＰ酶。研究发现ＡＴＰＴＢ在卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ中高表达，并且ＡＴＦ７Ｂ基因与顺铂耐药有关。反义寡核苷酸技术利用碱基互补配对原理使反义核酸与靶ｍＲＮＡ结合，形成ＲＮＡ－ＤＮＡ复合物，激活ＲＮａｓｅ Ｈ，降解ｍＲＮＡ，以达到抑制靶基因表达的目的。本研究旨在探讨ＡＴＰ７Ｂ反义寡核苷酸对卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞顺铂敏感性的影响。本课题共分二部分：１．针对ＡＴＰ７Ｂ基因反义寡核苷酸对人卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞株ＡＴＰ７Ｂ表达的影响；２．ＡＴＰ７Ｂ基因反义寡核苷酸对人卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞顺铂敏感性的影响。第一部分针对ＡＴＰ７Ｂ基因反义寡核苷酸对人卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞株ＡＴＰ７Ｂ表达的影响目的探讨针对ＡＴＰ７Ｂ基因的反义寡核苷酸对人卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞株ＡＴＰ７Ｂ表达的影响。方法人工合成包含ＡＴＩ＇７Ｂ ｍＲＮＡ翻译起始位点的反义寡核苷酸片段及正义寡核苷酸片段作为对照。用脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ．２０００（ＬＦ）将反义寡核苷酸片段及正义寡核苷酸片段转染卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞，用ＲＴ－ＰＣＲ法，流式细胞测定法，Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞转染后，ＡＴＰ７Ｂ基因ｍＲＮＡ、蛋白表复旦大学硕士学位论文达的变化。结果ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞以及转染反义寡核苷酸片段后ＡＴＰＴＢ与８．ａｃｔｉｎｍＲＮＡ的光密度比值分别为０．８３１±０．０６和０．２０３±０．０７（Ｐ＜０．０１）。流式细胞法检测细胞内ＡＴＰ７Ｂ蛋白的荧光强度由转染前的７９．４２±４．０４下降到５０．８７±５．４７（Ｐ＜０．０５）。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞以及转染反义寡核苷酸片段后，ＡＴＰ７Ｂ与Ａｃｔｉｎ蛋白的光密度比值分别为２．６０±０．４４和１．０１±０．０６（Ｐ＜０．０１）。而转染正义寡核苷酸片段及ＬＦ的ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞中，上述指标无统计学差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。结论ＡＴＰ７ＢＡＴＰＴＢ基因反义寡核苷酸片段能显著抑制卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞ｎｌＲＮＡ和蛋白表达。关键词ＡＴＰ７Ｂ反义寡核苷酸ＳＫＯＶ３ｉｐｌ第二部分ＡＴＰＴＢ基因反义寡核苷酸对人卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞顺铂敏感性的影响目的探讨ＡＴｌｒ７Ｂ基因反义寡核苷酸片段对人卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞顺铂敏感性的影响。方法人工合成包含ＡＴＰ７Ｂ ｍＲＮＡ翻译起始位点的反义寡核苷酸片段及正义寡核苷酸片段作为对照。用脂质体ｌｉｐｏｆｅｅｔａｍｉｎｅ．２０００（ＬＦ）将反义寡核苷酸片段及正义寡核苷酸片段转染卵巢癌ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞，用ＭＴＴ法检测ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞转染后，细胞半数抑制浓度（１Ｃ５０）的变化。结果转染ＡＴＰ７Ｂ反义寡核苷酸后，ＭＴｒ检测ＩＣ５０由转染前的１２６．６３４－１２．０６／ｔＭ下降为８０．９０±２０．０９／ａＭ（Ｐ＜Ｏ．０１）。而转染正义寡核苷酸片段及ＬＦ的ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞中，上述指标无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。结论ＡＴＰ７Ｂ基因反义寡核苷酸能增加ＳＫＯＶ３ｉｐｌ细胞对顺铂的敏感性。关键词Ａ】ｙ危反义寡蕾晤酸ｓＫｏｖ≯石耐药ＭＴＴ法２复旦大学硕士学位论文Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｎｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃＩｅｏｔｉｄｅ ｏｆＡＴＰ７Ｂ ｇｅｎｅｏｎｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｏｖａｒｉａｎｌｉｎｅ ＳＫＯＶ３ｉｐｌ（Ａｂｓｔｒａｃ０ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌＯｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒｉｓｏｎｅｏｆ ｔｈｅ ｌｅａｄｉｎｇｃａｕｓｅｓｏｆｄｅａｔｈ ａｍｏｎｇ ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｏｐｔｉｍａｌ ｃｙｔｏｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｓｕｒｇｅｒｙ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｈａｓｂｅｃｏｍｅ ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｏｖａｒｉａｎｃ，ａｎｃｃｒｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｉｎｔｒｉｎｓｉｃｏｒａｃｑｕｉｒｅｄ ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｓａｍａｊｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｏｂｌｅｍ ｆｏｒ Ｃａｌｌｃｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．ＡＴＰ７Ｂｉｓａｃｏｐｐｅｒ－ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ Ｐ－ｔｙｐｏａｄｅｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ．Ｉｔｗａｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌ