Pre-miRNA份子信标的构建与小份子化合物对Pre-miRNA加工的影响.pdfVIP

摘要 摘要 主要通过与靶标基因mRNA 3RJTR的完全或不完全配对，导致靶标基因mRNA 的降解或翻译抑制。miRNA参与到细胞的增殖、分化、凋亡和个体发育以及肿 ‘ 瘤发生等生理和病理过程。miRNA在正常组织中维持在一个相对稳定的水平， 它的高表达或者低表达通常与多种疾病相关。因而，对于miRNA加工过程的调 控具有着重要意义。 到的。我们已知有多种化合物(如氨基糖，多肽，吖啶)能够与RNA特异性的 识别与结合。理论上而言，可以通过加入小分子化合物来调控Dicer酶切 合物，具有广阔的发展前景。 本论文的研究分为以下三个部分： 一、本文基于已报道的RNA末端单端标记的方法，对反应路线和条件作进 RNA 一步优化，使得Oligo5’端和3’端的单端标记效率基本都能达到100％。将 RNA简便、快捷的双端标记。标记反 单端标记的方法进行组合，实现了Oligo 应通过丙烯酰胺凝胶电泳和荧光扫描等手段得到验证。 二、将双端标记方法应用于两种具有重要调控功能的miRNA前体(pre．1et-7 和TAR RNA分子信标(5’FAM， RNA)，得到了双端标记的pre．1et-7和TAR 团与3’端的淬灭基团相互靠近，发生荧光共振能量转移，荧光猝灭。Dicer酶切 以后， 3’端和5’端相互分离，荧光基团和淬灭基团游离开来，荧光又逐渐释放 出来。荧光分析表明Dicer酶切之后荧光强度有1～2倍的增长；聚丙烯酰胺凝 胶电泳表明Dicer酶切仍然能够产生2Int左右的小RNA，说明这种双端标记方 法是可靠的、有效的。 RNA 三、利用这个荧光检测体系，本文对潜在的能够调控pre-let．7和TAR 加工的小分子化合物做了初步筛选，为后续的高通量筛选奠定了基础。 摘要 II Abstract Abstract short(--22 MicroRNAs(miRNAs)are endogenouslyexpressed nt)，non-coding RNAsthat the of the negativelyregulate expressionprotein-codinggenesbybinding 3’untranslated mRNAsand eithertranslational regions(I瓜s)of target inducing ormRNA miRNAscallaffeetawide repression degradation．Generegulationby of ascell and rangebiological processes，suchcycleprogressionproliferation, differentiation,eellsurvival，and innormaltissuesmaintainat