几种甾体化合物抗肿瘤活性及与dna相互作用机制分析-anti-tumor activity of several steroidal compounds and analysis of their interaction mechanism with dna.docxVIP

摘要近年来，许多具有芳杂环结构的甾体化合物因其具有良好的生理活性而被广 泛报道。以甾体结构为母体，与芳环或芳杂环相并联，或者以甾体结构为母体， 外接一个芳环或芳杂环，由此得到的化合物往往表现出与母体不同的生理活性。本课题以孕烯醇酮及去氢表雄酮为母体，在其 20-位及 17-位分别引入萘环 或喹啉环，合成了三个具有芳杂环结构的甾体化合物：去氢表雄酮-Azine-甲叉喹 啉（代称化合物 A），去氢表雄酮-Azine-甲叉萘（代称化合物 B），孕烯醇酮-Azine- 甲叉萘(代称化合物 C)。对所合成化合物分别使用人胃癌细胞株（SGC-7901）、 宫颈癌细胞株（HeLa）、肝癌细胞株（Bel-7404）和结肠癌细胞株（HT-29）进 行体外抑制肿瘤细胞生长增殖活性研究，发现此三个化合物都具有很好的抑制肿 瘤细胞生长增殖活性。其中化合物去氢表雄酮-Azine-甲叉喹啉对 HT-29 和 SGC-7901 细胞的 IC50 值仅为 5.9 和 1.0μM。进一步利用 Annexin V 评估法，对 所合成化合物导致肿瘤细胞死亡的机制进行了分析测试，结果发现这些化合物抑 制肿瘤细胞生长主要通过诱导细胞凋亡的方式进行。另外，为了进一步研究化合物在分子层面抑制肿瘤细胞生长增殖的机制，本 文重点研究了所合成化合物和鲱鱼精 DNA(hsDNA)的分子作用机制。1．通过紫外可见吸收光谱分析 DNA 与化合物相互作用的光谱可知，化合物 A 和 B 与 DNA 作用发生减色效应，表明它们以嵌插或者静电方式与 DNA 结 合，而化合物 C 则发生增色效应使 DNA 双螺旋结构发生变化。2．通过碘化物猝灭实验, 可得知这三个化合物与 DNA 都存在嵌插作用。3．进行了不同离子强度对化合物与 DNA 结合影响实验，结果表明离子强 度的变化促进了 DNA 双螺旋结构的变化，影响了化合物与 DNA 的结合。4．通过不同变温竞争试验，计算出 Stern-Volmer 方程中不同温度下的结合 常数 KSV，得知这三个化合物都是通过静态猝灭方式进行，并且形成了复合物。 进一步求算得到的热力学常数说明氢键和范德华力是主要的分子间作用力。5．进行了 DNA 热变性实验，结果表明化合物也结合到 DNA 邻近的碱基对 上。6．测试了在不同 pH 值的缓冲溶液中化合物与 DNA 相互作用的影响，结果 证实二者之间存在非共价作用。我们的研究结果表明这几种甾体化合物与 DNA 存在不同程度的结合，其结 合方式采用嵌插结合，静电结合，氢键和范德华力交互作用等方式进行。但是主 要的结合方式是采用嵌插结合。同时，这些化合物也可以作为一个可能的 DNAI荧光探针而得到进一步应用。研究结果为下一步设计开发新的甾体抗肿瘤药物提供了重要的理论依据。 关键词：芳杂环甾体化合物；抗肿瘤活性；细胞凋亡；芳杂环甾体-DNA 作用；作用机制AbstractThe steroidal compounds bearing aromatic rings or heterocycles have been widely reported due to their good biological activity. It has been found that the steroidal compounds bearing aromatic rings or heterocycles show different biological activity compared with the parent compounds. In this thesis, three steroidal compounds bearing aromatic rings or heterocycles, dehydroepiandrosteronequinoline-4-methanylidenehydrazone (A) ， dehydroepiandrosterone naphthalen-2-methanylidenehydrazone(B)and pregnenolone naphthalen-2- methanylidenehydrazone (C)，were synthesized through the introduction of the corresponding aromatic rings and heterocycles on pregnenolone or dehydroepiandrosterone.In addition, the cytotoxicity of three steroidal compounds had been investigated by using SGC-7901,