家蚕茧层醇溶物的活性成份及抑制uvbdmba诱导的小鼠皮肤损伤和肿瘤发生-active ingredients of alcohol-soluble substances in silkworm cocoon layer and inhibition of uvbdmba - induced skin injury and tumorigenesis in mice.docxVIP
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家蚕茧层醇溶物的活性成份及抑制uvbdmba诱导的小鼠皮肤损伤和肿瘤发生-active ingredients of alcohol-soluble substances in silkworm cocoon layer and inhibition of uvbdmba - induced skin injury and tumorigenesis in mice
苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定, ltp: 学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文挡的内容和纸 质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献 信息情报中心、中国科学技术信息研究所〈含万方数据电子出版社〉、 中国学术期刊〈光盘版〉电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子 文档,允许论文被查阅和借阂,可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存和汇编学位论文,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数 据库进行检索,涉密论文口本学位论文属在一一-年一一月解密后适用本规定。 非涉密论文 o论文作者签名 2去金缉日期:2O后 -a)-Q导师签名:?j\ L日期z 洲… …………………………………………………………-中文摘要家蚕茧壳中除了丝素和丝胶两种主要的蛋白外,还有少量的色素、蜡质、碳 水化合物等组成的“杂质”。已有研究证实通过醇提的方法获得的丝胶层提取物主 要为黄酮类物质和游离氨基酸,在家蚕茧壳中黄酮类物质几乎都是以其糖苷类形 式存在,主要是槲皮素糖苷和一小部分山奈酚糖苷。在本文中,我们建立一种快 速、高效测定家蚕茧壳尤其是大造茧壳或是由大造培育的新品种绿茧中黄酮类物 质中苷元含量的准确方法,用醇酸水溶液辅助水解的方法将槲皮素和山奈酚苷元 从其糖苷中释放出来,再通过 HPLC-DAD 测定糖苷元的含量。250 mg 大造茧壳碎 片加入到甲醇-盐酸-水 (7:2:1, V/V/V) 三元溶液中,在 75 ?C 加热 4h 水解。通过五 次重复试验后,测到大造茧壳中槲皮素和山奈酚苷元含量分别为 1.98 mg/g 和 0.42 mg/g,相对标准差为 3.01%和 2.38%。用此方法测得茧壳中苷元槲皮素和山奈酚的 回收率分别为 99.56% 和 99.17%。上述这种方法测得的总黄酮即槲皮素和山奈酚 的总和为 2.40 ±0.07 mg/g,而用传统的以芦丁为标准品的比色方法测得的总黄酮虽然为 2.59 ±0.48 mg/g,但按分子量计算其槲皮素总量却为 1.28 ±0.04 mg/g,仅为上述方法测定值的一半。另外,利用 11 种普通茧、彩色茧、大造茧或荧光蚕茧进行 总黄酮含量比较分析表明,这两种分析方法测定的结果差异很大,几乎没有相关 性。所以,本文报道的通过醇酸水溶液辅助水解-HPLC-DAD 测定茧壳中总黄酮的 方法比以芦丁为标准品的传统比色方法更为准确,对于茧壳具有专属性,这对茧 壳资源的开发与综合利用具有重要的指导意义。长期暴露在 UVB 的辐射下会导致人体皮肤细胞内的氧化应激,引起皮肤的晒 伤、光老化甚至是肿瘤的发生。本文还对大造茧丝胶层醇提物 (EE)的抗氧化能力、 抗炎症和抗肿瘤活性进行了分析。结果表明,在 UVB/DMBA 诱导的小鼠皮肤瘤模 型中,溶剂组 (VC)小鼠背部肿瘤为 5.1,而丝胶层醇提物低剂量和高剂量涂抹组 分别为 3.2 个和 2.6 个。UVB/DMBA 处理使小鼠皮肤内的抗氧化能力受到极大的 破坏,然而丝胶层醇提物涂抹组的总抗氧化能力却提高到 1.63 U/mg 蛋白,接近 正常水平。丝胶醇提物涂抹处理组小鼠组小鼠肿瘤内 NF-?B 的表达水平从 1.16 ng/mg 蛋白降低到 0.53 ng/mg 蛋白。这些体内实验结果充分说明,大造茧壳丝胶 层醇溶物在小鼠表皮的涂抹处理,能够在细胞和分子水平上减小 UVB 造成的光损中文摘要家蚕茧层醇溶物的活性成份及抑制 UVB/DMBA 诱导的小鼠皮肤损伤和肿瘤发生伤,它通过调节氧化应激和炎症因子的水平来减小皮肤的炎症反应和肿瘤细胞的增殖。这种茧层醇提物能够提升小鼠体内抗氧化酶类的活性,减小 ROS 对 DNA的损伤,同时使炎症因子 IL6 和 TNF-α 的表达水平也降低。 本实验结果表明,大造茧壳丝胶层的醇提物除含有大量的丝胶游离氨基酸外,还主要含有生物活性物质黄酮类化合物—槲皮素和山奈酚及其衍生物,在健康食 品、抗肿瘤药物以及防晒护肤化妆品添加剂方面具有潜在的应用与开发价值,同 时对蚕桑产业特别是蚕桑副产物的充分利用以及蚕桑产业的持续发展具有一定的 现实意义。关键词:大造茧;总黄酮;酸水解;HPLC-DAD;UVB;氧化损伤;皮肤肿 瘤;抗氧化;抗炎症;抗肿瘤作者:赵金鸽 指导教师:张雨青Active components of ethanol extract from silkworm cocoon shell and its inhibition to DMBA/UVB-induced skin damage andtumor promotion in BALB/C mouse AbstractThe cocoon shell of the silkworm con
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